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L-天冬酰胺酶Ⅱ文献资料
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重组L-天冬酰胺酶Ⅱ的中试工艺及其性质的研究
目的:通过重组L-天冬酰胺酶Ⅱ中试工艺及其性质的研究,旨在获得大量的高纯度产品.方法:采用500 L发酵罐发酵,对所获得菌体进一步提取纯化,产品用还原SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳法),HPLC测定纯度,质谱和等电聚焦电泳分别测相对分子质量、等电点,并进行了紫外扫描.结果:发酵液产酶活力达到200 U.mg-1,提取回收率为80%,纯化总回收率为57%,产品比活为220 U.ml-1,电泳30 μg上样量显示一条带,HPLC测纯度大于95%.该酶Mr为138356,pI为4.85,紫外大吸收值在278 nm处.结论:本研究对实现重组L-天冬酰胺酶Ⅱ的工业化生产有重要意义.
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重组大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ中残余DNA的检测
用地高辛标记工程菌DNA片断作探针,通过分子杂交和免疫显色检测重组天冬酰胺酶半成品中的残余DNA.该法对半成品用氯仿抽提,消除了蛋白质对DNA测定的干扰.3批重组门冬酰胺酶半成品的测定结果表明,其残余DNA均小于100 pg/剂量.
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L-天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌的培养
为提高L-天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌Esch erichia coli pKA/CPU210009的产酶量,采用正交试验法确定了较佳培养条件,并优化了发酵工艺.工程菌摇瓶产酶稳定在190U/ml.25L发酵罐产酶亦高达180U/ml,发酵周期大大缩短,仅9～10h.产酶量比原工艺提高1倍以上,具有较好的工业生产前景.
