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液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测人类辅助生殖技术用液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺含量
目的:建立采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺指标成分的方法,分析不同用途培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺的含量.方法:采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法,使用SUPELCO Discovery HS F5-3色谱柱(150 mm×2.1 mm,3 μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.35 mL·min-1,柱温40℃;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式扫描,扫描方式为多反应监测.结果与结论:N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺在1.276～12.76μg·mL-1浓度范围内线性关系良好;平均加样回收率在100.5％～103.0％,相对标准偏差小于1.98％.说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强,可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据.
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N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对肾缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关因子表达的影响
目的 探讨N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(LAG)对肾缺血再灌注致心肌细胞凋亡及相关因子表达的影响.方法 清洁级Wistar大鼠30只,体重250～300 g,随机分为3组(n=10):假手术组(sham组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和LAG处理组(LAG+I/R组).Sham组仅切除右肾,游离左肾动脉,关腹.LAG+I/R组和I/R组切除右肾,夹闭左肾动脉45min再灌注以制备肾缺血再灌注模型,分别于夹闭动脉前30min给予LAG 150mg/kg和等量生理盐水.三组均于再灌注6h处死大鼠,取心肌组织,HE染色观察病理组织学变化,Masson染色观察心肌细胞变化;ELISA检测血浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western-blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平.结果 N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺能够减轻肾缺血再灌注致心肌细胞损伤,可降低MDA表达水平,升高SOD表达(P＜0.05),抑制心肌中Bax和Caspase-3蛋白表达(P＜0.05).结论 肾缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡,造成一定的心肌损伤,LAG对肾缺血再灌注心脏损伤的保护作用可能与升高SOD和Bcl-2表达,降低MDA、Bax和Caspase-3表达相关.
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N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺及有关物质的高效液相色谱分析
目的 考察不同色谱条件下N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-Ala-L-Gln)及其有关物质的色谱行为,建立L-Ala-L-Gln有关物质的高效液相色谱含量测定方法.方法 氨基键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至4)70∶30为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长为215 nm;柱温为40 ℃.结果 L-Ala-L-Gln在10～100 μg/mL浓度范围内呈良好线性关系(r=0.999 8),并且可以同时测定含量和有关物质,重复性试验RSD为0.81%(n=6).结论 此法简单,分离度良好,结果准确,可以用于L-Ala-L-Gln的含量和有关物质的检测.
关键词： N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 有关物质 高效液相色谱法 -
柱前衍生化HPLC法测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液的含量
目的 建立柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)法测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液含量的方法.方法 采用异硫氰酸苯酯作柱前衍生剂,色谱柱为Waters sunfire ODS柱(4.6 mm×250 mm),流动相为:乙腈-0.1 mol/L醋酸钠(用稀醋酸调整pH 5.50)为44∶56,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 线性范围为0.025～2.5 mg/mL(r=0.999 8),平均加样回收率为99.9%,RSD为0.5%.结论 此法操作简单快速,灵敏度高,结果准确可靠,适用于N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液中N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的含量测定.
