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乳牙牙髓干细胞CD146阳性/阴性细胞亚群生物学特性的比较
目的:通过磁激活分选法(magnetically activated cell sorting,MACS)技术对人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated teeth,SHED)进行分选,获得纯度较高的CD146阳性及阴性细胞亚群,比较其生物学特性.方法:用MACS技术对SHED进行CD146分选获得未筛选的混合细胞群、CD146阳性和阴性细胞亚群,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和集落形成实验(colony-forming unit,CFU)检测增殖能力;成骨诱导后进行茜素红染色,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测成骨相关基因RUNX2、OCN、BSP表达;成脂诱导后进行油红O染色,qPCR检测成脂相关基因LPL、PPARG表达;成神经诱导后细胞免疫荧光检测神经细胞标志蛋白nestin、NeuN、GFAP,qPCR检测成神经相关基因nestin、MAP2表达.结果:CD146阳性和阴性细胞亚群的增殖能力都显著低于混合细胞群.混合细胞群、阳性细胞亚群、阴性细胞亚群的集落形成率分别为28.6％±3％、17.1％±2.3％和27.5％±2.5％.诱导后,阳性细胞亚群的矿化物沉积多、成骨相关基因表达升高显著;阴性细胞亚群的脂滴形成多、成脂相关基因表达升高显著;未分选混合细胞群和阳性细胞亚群胶质细胞标志蛋白阳性表达,而阴性细胞亚群的神经前体细胞和神经元标志蛋白和基因表达升高显著.结论:CD146阳性与阴性细胞亚群的增殖能力弱于混合细胞群;阳性细胞亚群的成骨潜能佳,阴性细胞亚群具有更强的成脂分化潜能;混合细胞群与阳性细胞亚群倾向于胶质细胞分化,阴性细胞亚群神经前体细胞和神经元分化潜能更强.
