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巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿ZFY基因的研究
目的:建立一种无创伤性产前基因诊断的方法.方法:自行建立巢式PCR方法对46例10～40孕周的初孕妇血浆中游离胎儿Y染色体ZFY基因进行扩增,扩增片段分别为354bp和307bp,46例均采用母体血浆直接作为模板进行巢式PCR.结果:39 例妊娠男性胎儿孕妇血浆中有 32 例出现ZFY基因条带,检出率为82.1%(32/39),其中 24 例 2 次扩增均为阳性,8 例第 2 次扩增才出现阳性条带, 巢式PCR可明显提高检测敏感性(从61.5%提高到82.1%).7例妊娠女性胎儿孕妇血浆2次均未出现阳性扩增带,无假阳性结果.本研究的性别总符合率为84.8%(39/46).结论:巢式聚合酶链反应检测母体血浆中游离胎儿DNA的敏感性和特异性较高,有希望成为无创伤性产前基因诊断方法应用于临床.
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微量胎儿细胞中Y染色体锌指结构基因自动测序及影响因素的探讨
目的:在已建立的较简便、敏感的对性连锁遗传病胎儿进行产前性别鉴定方法的基础上探讨高温循环全自动测序中几个因素对测序鉴定ZFY基因结果的影响.方法:自行设计 ZFY 引物并建立了富集胎儿细胞结合巢式聚合酶链反应扩增男性特异性 ZFY 基因并进一步循环测序方法,计算机辅助设计的两对寡核苷酸引物位于 Y 染色体短臂的 Ucdo 43 保守区内;同时对 DNA 纯度、浓度和测序过程中水的质量对 DNA 自动测序结果的影响进行回顾性分析.结果:实验表明利用孕妇外周血中微量胎儿细胞扩增男性特异性 ZFY 基因并进行高温循环全自动测序方法可行,结果可靠,在 DNA 纯度、浓度较低以及配制测序胶时所用纯水水质较差时,对测序曲线造成不同程度的影响,从而影响测序结果.结论:提示该方法检测胎儿 DNA 是可行的,同时在 DNA 自动测序鉴定产物特异性时需使用高纯度高浓度的 DNA 和高质量的纯水,要想获得较长的测序片段,所用模板浓度不能太低.
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Y染色体ZFY基因检测在组织工程中的应用
目的 探讨人的Y染色体ZFY基因诊断在组织工程中的应用.方法 对两种人的组织工程皮肤"替代物"进行RT-PCR检测,从mRNA水平检测Y染色体ZFY基因表达.用三条引物同时扩增,Y染色体可产生两个片断,X染色体产生一个片断.结果 取男性细胞构建的表皮膜片修复女性皮肤缺损区的少量组织,可以检测到494bp和294bp两个条带;女性则494bp一个条带.检出率达100%(16/16).用男性包皮角质干细胞构建的复合皮肤修复雌鼠全层皮肤缺损,取植入处少量组织检测到人的Y染色体494bp和294bp两个条带,且维持创面修复时间长达8个月.结论 Y染色体ZFY基因诊断可作为组织工程皮肤替代物性别标记,且可以跟踪检测,具有特异、准确之优点.
