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二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的鉴定与应用
目的:抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(dicarbonyl/L-xylulose reductase, DCXR)的单克隆抗体(mAb)的初步鉴定与应用.方法:通过免疫荧光染色法对DCXR mAb进行亚细胞定位,通过免疫沉淀法对DCXR mAb进行初步应用研究.结果: DCXR mAb定位于肝脏的线粒体,通过免疫沉淀法该mAb可以从线粒体总蛋白中去除相应的蛋白DCXR.结论:成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具.
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不育男性精子DCXR mRNA表达与顶体酶阳性反应率的关系
目的 探讨原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精力的关系.方法 收集88例精液标本,其中正常生育组20例,不育男性68例.参照世界卫生组织(WHO)标准方法对标本进行精液常规分析,68例不育标本分为不育A组和不育B组.采用实时荧光定量PCR法,检测DCXR基因mRNA的相对表达量;以固定底物膜法观察顶体酶阳性反应率;以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精试验(SPA)检测精子受精力.结果 实时荧光定量PCR检测结果显示:正常生育组的精子DCXR基因mRNA的相对表达量明显高于不育A、B两组,经统计学分析均有显著性差异(P＜0.05);不育A、B两组的精子顶体酶阳性反应率和受精率与正常生育组比较均有显著性下降(P＜0.05).相关性分析提示精子DCXR基因mRNA的相对表达量与顶体酶阳性反应率存在正相关性(r=0.440,P＜0.01),精子DCXR基因mRNA的相对表达量与受精率存在正相关性(r=0.422,P＜0.01).结论 原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达减少,精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精率有一定相关性.
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抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbonyl/L-xylulose reductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果:获得1株可稳定分泌抗人DCXR mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验.结论:成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具.
