您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
质粒载体pEGFP-Nl文献资料
-
稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究
目的 研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法.方法 采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒PcDNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A.将HBx目的基因片段和质粒载体pEGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为pEGFP-HBx.重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养.用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为pEGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体pEGFP-Nl,作为pEGFP-Nl质粒组.后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况.结果 pEGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28％,且表达程度强;Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,pEGFP-HBx组内MicroRNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于pEGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究成功地构建了稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、miRNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础.
