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tpi文献资料
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腹泻新病原艰难梭菌DNA提取方法的比较研究
目的:比较提取高质量艰难梭菌基因组总DNA的方法.方法:采用4种不同方法提取艰难梭菌基因组DNA,比较作为模板用于扩增艰难梭菌看家基因磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的优缺点.结果:除沸水浴法,其他3种方法制备的艰难梭菌DNA均能成功用作PCR扩增的模板.CTAB/NaCl法进行提取可有效去除多糖成分,但操作要求较高.碱裂解法操作简便、省时、成本低经济可靠,提取的DNA量及纯度较合适;试剂盒抽提出的产物纯度和产量明显高于CTAB/NACL、碱裂解法(P<0.05),但成本高.结论:四种方法各具优缺点,应根据实验室条件和实验要求进行选择.
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实时荧光PCR快速检测粪便中艰难梭菌方法
目的:建立实时荧光PCR快速检测艰难梭菌的方法.方法:以艰难梭菌磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的保守序列为模板设计和合成特异性引物和荧光标记探针,建立实时荧光PCR检测体系,通过检测含有艰难梭菌标准菌株浓度为10(6)-10 CFU/ml的细菌培养物及加标模拟样本进行敏感性分析,并对其特异性和干扰性进行评价.结果:该方法只对艰难梭菌进行特异性扩增,其他常见的病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要2h,对艰难梭菌菌悬液可检测至10 CFU/ml细菌,对加标粪便样本可检测至1000 CFU/ml细菌.结论:本研究建立的实时荧光PCR检测艰难梭菌方法具有快速、特异、敏感性高等优点,能实现对艰难梭菌的快速检测.
