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重组人睫状神经因子(rhCNTF)对谷氨酸钠肥胖大鼠减肥作用机制的实验研究
目的 研究短、长期应用rhCNTF对谷氨酸钠肥胖大鼠的减肥作用机制,为新药开发提供药理动物实验依据.方法 建立谷氨酸钠(MSG)大鼠模型.3月龄时将肥胖动物随机分10组,长、短周期各5组分别给药.长周期连续给药33 d,短周期连续给药10d.末次给药24 h后空腹断头,取生殖器周围同一部位小块脂肪组织经10％福尔马林固定后做光镜检查(400倍),取三个视野计数全视野脂肪细胞数并计算平均值；取空肠固定于电镜液,电镜扫描观察空肠绒毛密度及相对吸收表面积大小.结果 1)造模:正常大鼠体质量为(189.40 ±38.72)g,谷氨酸钠肥胖大鼠平均体质量为(246.72±36.67)g,(P＜0.001)；LI(Lee's指数)分别为289.27±9.05和304.42±9.64(P ＜0.001).说明造模成功.2)药物实验结果中,短周期给药组:高、中剂量组脂肪细胞体积变小,高剂量组空肠绒毛密度下降,相对吸收面积减小(P＜0.01或P＜0.05)；长周期给药:高、中剂量组脂肪细胞体积变小,空肠绒毛密度下降,相对吸收面积减小(P＜ 0.01或P＜0.05).结论 每天皮下注射rhCNTF 30～300 μg/kg使谷氨酸钠肥胖大鼠的脂肪细胞变小,减肥作用与减小空肠绒毛膜吸收面积有关,作用呈剂量依赖性.
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长期应用重组人睫状神经因子(rhCNTF)对谷氨酸钠肥胖大鼠血脂的影响
目的 研究长期应用rhCNIF对谷氨酸钠(MSC)肥胖大鼠血脂的影响.方法 建立MSG肥胖大鼠模型.3月龄时将肥胖动物随机分5组:分别皮下注射rhCNTF 300μg·kg-1·d-1(高剂量组)、100μg·kg-1·d-1(中剂量组)、30μg·kg-1·d-1(低剂量组);西布曲明灌胃8 mg·kg-1·d-1(阳性对照组);模型组和对照组均给予生理盐水1 mL·kg-1·d-1,连续给药33 d.末次给药后24 h,同时动物禁食过夜后,在水合氯醛麻醉下测体重、身长,计算LI;断头后取腹部脂肪称重计算脂肪系数;腹主动脉取血离心后测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、血糖和血清胰岛素水平.结果 (1)造模:正常大鼠189.40±38.72 g,谷氨酸钠肥胖大鼠平均体重(246.72±36.67)g,(P<0.001);LI(Lee's指数)分别为289.27±9.05和304.42±9.64(P<0.001),说明造模成功.(2)药物实验结果高、中剂量给药组LI、脂肪系数、血总胆固醇、甘油三酯、血糖明显下降,高剂量组胰岛素水平也有所下降,达到统计学要求的显著性.结论 rhCNTF 30～300μg·kg-1·d-1皮下注射连续用药33 d,对谷氨酸钠肥胖大鼠具有明显的降脂作用,可能对Ⅱ型糖尿病肥胖有效.
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重组人睫状神经因子聚乙二醇化条件的优化
目的 对单甲氧慕聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化.方法 优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化.鸡胚背根节培养法检测和比较rh-CNTF和PEG-rhCNTF的体外生物学活性.结果 rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF的浓度和pH值是主要影响因素,佳pH为6.5,佳rh-CNTF浓度为1～2 mg/ml,rh-CNTF与PEG的佳质量比为1:1,时间和温度影响甚微.rh-CNTF的体外神经营养活性约为PEG-rhCNTF的2倍.结论 本法优化了修饰重组人睫状神经因子的条件.
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重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰
目的 研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法.方法 重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4 h,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF.以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性.用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20 k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物.结果 目的 蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF.表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长.修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%.结论 确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法.
