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bMSC对肾小管上皮细胞的保护作用及其作用机制
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bMSC)移植对大鼠UUO模型肾小管上皮细胞超微结构的改善作用及其可能的作用机制.方法 体外分离培养雄性Wistar大鼠bMSC,体外Brdu标记,将Brdu-bMSC注入同种大鼠体内.45只受体大鼠随机分为3组:假手术对照组(SH组,n=15)、Brdu-bMSC+ UUO组(BM组,n=15)、生理盐水+UUO组(NS组,n=15).分别在3d、7d和14 d处死大鼠,取下肾脏组织,电镜观察肾小管上皮细胞微结构变化.采用免疫组织化学方法检测Brdu阳性bMSC.结果 电镜下,随着结扎时间延长肾小管上皮细胞微结构破坏逐渐加重,术后3d、7dBMSC组肾小管上皮细胞超微结构明显改善；未在大鼠肾脏组织中发现Brdu阳性细胞.结论 bMSC移植可短期内改善肾小管上皮细胞超微结构,对肾小管间质病变起到保护作用,其作用机制可能是通过旁分泌作用.
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体外冲击波结合自体5-BrdU标记骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究
目的 在体外成功分离培养标记兔骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的基础上,观察体外冲击波疗法(Extracorporeal shock wave therapy,ESWT)结合自体BMSCs移植治疗骨不连的疗效.方法 制作兔骨不连模型并根据于预方式不同随机分为4个组:冲击波结合干细胞组,干细胞组,冲击波组,完全对照组.定期拍片测量骨折间隙宽度变化(2周、6周、10周)、免疫组化观察,10周后比较愈合率.结果 标记后的干细胞移植6周后,在冲击波结合干细胞组、干细胞组骨痂中可见(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记的阳性细胞聚集,冲击波组和对照组中未发现明显的聚集现象;冲击波结合干细胞组干预后6周、10周,与其它各组骨不连间隙差异有显著性;10周后冲击波结合干细胞组骨不连愈合效果好,与其他各组统计学上差异有意义.结论 移植的自体干细胞可能参与了骨不连的成骨,结合冲击波的微动力学刺激,有利于骨折的愈合,有望成为一种较好的骨不连治疗方法.
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乳猪窦房结细胞原代培养及与Col Ⅰ纤维支架复合培养实验研究
目的 对乳猪窦房结所在部位进行准确定位,建立一套可靠的窦房结细胞取材、分离、纯化培养技术;观察窦房结细胞与Col Ⅰ纤维支架的相容性. 方法 24h内新生纯种长白山乳猪5只,雌雄不拘,体重0.45～0.55 kg.实验动物采用多导电生理记录仪标记房波早出现的部位,在该位置取材行原代窦房结细胞培养,分别采用常规方法 培养和差速贴壁分离技术、5-BrdU处理纯化培养;于左心房部位取材行心房肌细胞纯化培养作为对照.倒置显微镜观察细胞形态、细胞贴壁时间、单细胞出现搏动时间、搏动频率等.将纯化培养的窦房结细胞以5 × 105个/mL密度接种至经预湿处理的Col ×纤维支架复合培养5 d,行HE染色观察及扫描电镜观察. 结果 房波早出现的位置即为窦房结所在部位.纯化培养的窦房结细胞有3种形态,即梭形、三角形与不规则形,其中梭形细胞多;心房肌细胞主要为三角形及不规则形,而无梭形细胞.窦房结细胞纯化培养与常规培养比较,梭形细胞所占比例分别为73.0%±2.9%、44.7%±2.3%,二者差异有统计学意义(P<0.01);不规则形细胞分别为7.0%±1.7%、36.1%±2.6%,二者差异有统计学意义(P<0.01);三角形细胞分别为20.0%±2.1%、19.2%±2.5%,二者差异无统计学意义(P>0.05).窦房结细胞复合Col Ⅰ纤维支架培养5 d,HE染色观察示Col Ⅰ纤维支架材料中有大量细胞;扫描电镜见细胞成团吸附于支架表面及孔隙侧壁,并可见细胞间通过突起相互连接,或伸出伪足贴附于支架孔隙壁上. 结论 通过准确窦房结定位,采用差速贴壁结合5-BrdU处理的纯化培养可明显提高乳猪窦房结梭形细胞比例,是一种可靠的窦房结细胞纯化培养技术.窦房结细胞和Col Ⅰ纤维支架有较好的细胞相容性.
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5-BrdU标记的骨髓间充质干细胞对大鼠创面愈合的作用研究
目的:探讨经5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在大鼠创面愈合中的作用.方法:分离培养大鼠BMSCs并用流式细胞仪技术鉴定.将大鼠背部脊柱一侧作为实验组并制作一全层皮肤缺损模型,其对侧为对照组,经尾静脉注入经5-BrdU标记的BMSCs,移植细胞数为2×107个.术后3天、7天、14天、21天、28天分批处死动物,观察移植细胞参与创面愈合的情况.结果:流式细胞仪鉴定细胞表达CD29、CD90表达阳性;CD45表达呈阴性.实验组:经5-BrdU体外标记的BMSCs进行细胞移植14天后大鼠创面局部及边缘可见5-BrdU标记的阳性细胞聚集,免疫组化染色可见基底层、真皮层、新生血管周围有散在红棕色标记细胞;对照组中未发现明显的聚集现象;抗5-BrdU/FⅧ、5-BrdU/波形蛋白免疫双标技术检测结果显示:在创伤部位有部分BMSCs分化为血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合.大鼠对侧正常皮肤中未见明显的BMSCs聚集和增殖分化情况.结论:5-BrdU标记的BMSCs参与皮肤创面愈合.
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静脉移植5-BrdU标记骨髓间充质干细胞参与创面愈合的作用研究
目的:探讨经尾静脉移植入体内的骨髓间充质干细胞(BMSCs)参与皮肤创面愈合的情况.方法:以SD大鼠为研究对象,分离、培养并鉴定大鼠BMSCs.制作大鼠全层皮肤缺损动物模型;经尾静脉注入经5-BrdU标记的骨髓间充质干细胞,于不同时间点(3、7、14、21、28天)观察移植细胞参与创面愈合的情况.结果:经流式细胞仪鉴定细胞表达CD29、CD90表达阳性;CD45表达呈阴性;经体外标记的5-溴脱氧尿嘧啶标记率＞90%;标记后的干细胞进行移植4周后,实验组大鼠创面局部及边缘可见BrdU标记的阳性细胞聚集,对照组中未发现明显的聚集现象.结论:5-BrdU完全能够满足移植细胞的标记需要.经尾静脉注射移植入体内的BMSCs可能参与皮肤创面愈合.
