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8-oxodGTP文献资料
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秀丽隐杆线虫NDX-4蛋白的体外表达及酶学活性研究
目的 构建秀丽隐杆线虫NDX-4基因的克隆载体和表达载体,诱导NDX-4蛋白表达,研究NDX-4的体外酶学活性.方法 构建NDX-4的克隆载体,将NDX-4的开放阅读框架(ORF)插入PGEM-T载体中扩增;采用双酶切将NDX-4ORF连入表达载体pET-30a(+)中;将连接质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对NDX-4蛋白进行表达诱导,并进行树脂纯化;用SDS-PAGE和Western blot检测以评价NDX-4体外表达和纯化的质量;采用高效液相色谱-紫外检测技术(HPLC-UV)检测NDX-4蛋白水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的活性.结果 SDS-PAGE和Western blot 检测均在经IPTG诱导的蛋白提纯物泳道上出现单一条带,分子质量约为24kDa,而未诱导的和空载体均未见条带.HPLC-UV检测结果显示加入NDX-4蛋白的8-oxodGTP和8-oxoGTP均被水解为相应的单磷酸和二磷酸氧化核苷,并且随着蛋白量的增加,两种产物的量逐渐增多.结论 秀丽隐杆线虫的NDX-4蛋白具有水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的双重功能,可能对抑制DNA和RNA的氧化损伤具有重要意义.
