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肿瘤睾丸抗原BORIS研究进展
在世界卫生组织疾病统计中,肿瘤的发生率和病死率均很高,肿瘤的诊断和治疗已成为当今医学研究的热点和难点.肿瘤细胞中特异和异常表达的因子是肿瘤诊疗的潜在靶标.肿瘤睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)印记位点调节物兄弟因子(the brother of the regulator of imprinted sites,BORIS)在多种肿瘤组织中特异性高表达,与肿瘤发生、发展以及恶性程度密切相关.BORIS通过调节启动子区域的甲基化水平影响原癌基因cMYC、乳腺癌基因BRCA1等下游靶基因的表达,改变肿瘤细胞生物学活性和分化干性,促进肿瘤细胞的增殖、转移、侵袭.本文综述了BORIS在癌症发生、发展中的作用,阐述了BORIS在癌症诊疗中的研究价值和应用前景.
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BORIS在结肠癌中的表达及其临床意义
目的:检测结肠癌组织中BORIS基因表达,探讨其临床意义.方法:采用RT-PCR以及免疫组织化学技术检测50例结肠癌组织以及20例正常结肠组织中的BORIS表达,并对患者进行随访,探讨BORIS在mRNA水平以及蛋白水平的表达与结肠癌肿瘤大小、部位、分级等因素的关系,以及BORIS蛋白表达与结肠癌患者生存率的关系.结果:BORIS的mRNA及蛋白在正常结肠组织中无表达,而在结肠癌组织中高表达,其表达与结肠癌组织学类型、部位无关,与结肠癌的组织学分级(P＜0.05)呈负相关,与肿瘤大小(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.05)呈正相关,BORIS蛋白阳性表达的患者3年生存率低于无表达的结肠癌患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:BORIS在结肠癌组织中的重新表达可能与结肠癌的发生有关,可能作为一种肿瘤标志物,在预测结肠癌早期转移以及患者预后中起一定作用.
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BORIS通过表观修饰对人肝癌细胞SOCS3表达的调控
目的 探讨人肝癌细胞系中印记位点结合因子(BORIS)对细胞因子信号传导抑制因子-3(SOCS3)表达的调控方式.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SOCS3 mRNA在肝癌细胞中的表达;Westernblot检测敲低和过表达BORIS的肝癌细胞中SOCS3蛋白的表达;在敲低和过表达BORIS的肝癌细胞系中使用甲基化特异性PCR(MSP-PCR),检测SOCS3基因启动子区域甲基化状态;通过UCSC数据库分析,找到SOCS3基因启动子区潜在的BORIS结合位点,使用染色质免疫共沉淀(ChIP)-实时定量PCR(ChIP-qPCR)探索内源性高表达BORIS细胞中BORIS在SOCS3启动子区的富集状况;通过ChIP-qPCR检测敲低和过表达BORIS对SOCS3启动子区组蛋白甲基化状态.结果 在肝癌细胞中SOCS3 mRNA表达较高,在敲低或过表达BORISmRNA肝癌细胞中,SOCS3蛋白表达相应下调或上调,即在肝癌细胞中BORIS以正向调控的方式调控SOCS3蛋白质的表达;MSP-PCR实验显示在SMMC-7721和HepG2细胞SOCS3启动子为非甲基化,敲低BORIS不改变甲基化状态,Huh7细胞的SOCS3启动子区为甲基化状态,过表达BORIS后,SOCS3启动子区转变为非甲基化状态,但在HCCLM3中SOCS3启动子为非甲基化,过表达BORIS不影响甲基化状态;ChIP-qPCR表明在内源性高表达BORIS的细胞中,BOR IS特异性结合在SOCS3启动子区;组蛋白甲基化检测结果表明,敲低BORIS减少了BORIS在SOCS3启动子区富集,同时减少该区域H3K4 me2,增加H3K27 me3,而在过表达BORIS的细胞中呈现相反的结果.结论 BORIS作为一个表观遗传调控因子调控SOCS3基因启动子区的甲基化状态和组蛋白甲基化修饰,影响SOCS3的表达,进而参与肝癌发生发展的过程.
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抗人BORIS单克隆抗体的制备及在乳腺疾病和正常乳腺组织中的分布
目的:制备抗BORIS的单克隆抗体(mAb), 并在蛋白水平上研究BORIS抗原在乳腺癌、良性乳腺病及正常乳腺组织(癌旁远端组织)上的分布特点.方法:以人BORIS重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 应用B淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌抗BORIS mAb的杂交瘤细胞株.用免疫组化染色法检测BORIS抗原在睾丸组织、乳腺癌、乳腺良性病和正常乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达.结果:获得 4株稳定分泌抗BORIS mAb的杂交瘤细胞株.其中抗体编号为FMU-BORIS13( IgG1)可用于免疫组化的染色.结果显示, BORIS抗原在正常睾丸的精原细胞和精母细胞的细胞核内表达, 符合CT抗原的表达特点.组织芯片的免疫组化染色结果显示其在乳腺癌组织中呈高水平的表达, 阳性率为85% (94/110), 在良性乳腺病组织中其表达的阳性率为95%(21/22 ).另外, 在6例乳腺癌癌旁远端近似于正常的乳腺组织中也检测到BORIS抗原的表达.BORIS抗原在乳腺癌组织中的表达远高于其在良性乳腺病和正常的乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达.结论:BORIS的高表达可能与乳腺癌的发生发展有一定的关系.
