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SiRNA 干扰慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节 MrgC表达及 PKCε磷酸化的研究
目的：观察鞘内注射小干扰 RNA （ small interference RNA， siRNA ）对完全弗氏佐剂（ complete freund’s adjuvant， CFA）诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节（dorsal root ganglion， DRG）中MrgC（Mas-related G protein-coupled receptor C， MrgC） mRNA与蛋白表达的干扰作用，并观察该作用对大鼠患足痛阈及患侧DRG PKCε丝氨酸729点位磷酸化（ phosphorylation of PKCε Ser729， p-PKCε Ser729）水平的影响。方法健康雄性 SD （ Sprague-Dawley，SD）大鼠16只，随机分为对照siRNA组，MrgC siRNA组，每组8只。大鼠脊髓鞘内插管成功后，两组大鼠给予相应药物鞘内注射4 d，1次／d，5μg／d／只。给药第4 d，大鼠右后足底注射CFA 0.1 mL建立慢性炎性痛模型，此后隔日注射药物，直至给药第11 d处死。分别于鞘内置管前、给药前、给药4 d（ CFA造模0 h）、给药5 d （CFA造模24 h）、给药11 d（CFA造模7 d）5个时点检测大鼠患足机械缩腿阈（Paw withdrawal thresholds， PWTs）的变化。荧光定量PCR法检测患侧DRG MrgC的mRNA的表达，免疫荧光法检测患侧DRG MrgC表达量及p-PKCεSer729的含量。结果与给药4 d比较，给药5 d两组大鼠的PWTs均有显著的下降（ P＜0.01）；给药前后各时点，两组大鼠之间PWTs没有明显差异。观察给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA的表达，与对照siRNA组比较，MrgC siRNA组各神经节MrgC mRNA的表达均明显下降（P＜0.01）；观察大鼠给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC与p-PKCεSer729的表达，与对照siRNA组比较，MrgC siRNA组患侧DRG的MrgC阳性细胞率明显减少（ P＜0.01），而p-PKCεSer729的阳性细胞率显著上升（P＜0.05）。结论 MrgC siRNA片段可有效干扰CFA慢性炎性痛大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA与MrgC的表达，对MrgC的干扰作用能显著上调PKCεSer729磷酸化的水平，但不影响大鼠患足机械缩腿阈。
