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Mir-106b对阿尔茨海默病昼夜节律调控的初步研究
目的 探讨mir-106b在阿尔茨海默病发病中的作用.方法 取6月龄APPswe/PSΔE9 小鼠脑组织,进行microRNA 芯片的检测;利用real-time PCR 对芯片检测结果 进行验证;构建mir-106b表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中构建mir-106b稳定转染的稳转细胞系.用Targetsan、Pictar、miRanda等靶基因预测软件,对mir-106b的靶基因进行预测,根据靶基因的功能选择可能与AD发病相关的靶基因,并用Western blot对所选择的靶基因在稳转细胞中的表达进行验证.用双荧光素酶报告检测系统检测mir-106b与其靶基因的结合位点.结果 芯片结果 显示,与野生型小鼠相比, 6月龄APPswe/PSΔE9 小鼠脑组织中mir-106b的表达下降,经real-time PCR 验证,mir-106b的表达在APPswe/PSΔE9 小鼠脑组织中的表达较野生型小鼠升高,差别具有统计学意义(P=0.03).mir-106b稳转细胞系较对照mir-106b的表达升高2～5倍.神经PAS结构域蛋白2(neuronal PAS domain protein 2,NPAS2)在mir-106b稳转细胞中的表达明显下降.双荧光素酶报告实验证实:与对照相比,带有NPAS2的3'UTR的荧光素酶报告载体与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性降低;荧光素酶报告载体的NPAS2-3'UTR突变后与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性升高.结论 mir-106b可能通过调节机体生物钟基因NPAS2的表达,影响阿尔茨海默病人的生活节律,参与阿尔茨海默病的发生.
关键词： 阿尔茨海默病 microRNA 转基因小鼠 芯片 神经PAS结构域蛋白2
