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microRNA?494通过TLR?4通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制
目的 探讨microRNA?494(miR?494)通过Toll样受体?4(TLR?4)通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制.方法 选用小鼠成骨细胞株MC3T3?E1作为体外模型,采用miR?494 mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3?E1,采用qRT?PCR法测定miR?494在小鼠成骨细胞株MC3T3?E1转染前后的表达情况;通过MTT法检测转染前后小鼠成骨细胞株MC3 T3?E1的增殖情况;通过测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,研究小鼠成骨细胞株MC3T3?E1的分化情况;通过骨钙素(osteocalcin,OC)定量检测分析和Von Kossa钙化染色检测小鼠成骨细胞株MC3 T3?E1的基质矿化情况;通过Western blot等检测转染前后TLR?4蛋白的表达差异.结果 qRT?PCR测定结果显示,与阴性对照组相比,小鼠成骨细胞株MC3 T3?E1转染后的miR?494的mRNA的表达量升高(P<0.05),说明miR?494 mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3?E1,成功使miR?494过表达.与阴性对照组相比,经过miR?494 mimic转染后,小鼠成骨细胞株MC3T3?E1的增殖能力受到抑制(P<0.05).转染后的小鼠成骨细胞株MC3T3?E1中ALP的活性降低(P<0.05).同时,转染后的小鼠成骨细胞株MC3T3?E1中OC的活性显著降低(P<0.05),矿化结节的数目、减少(P<0.05).Western blot结果显示,与阴性对照组相比,miR?494 mimic转染组细胞中的TLR?4蛋白表达量显著升高(P<0.05).结论 miR?494能够通过TLR?4通路抑制小鼠成骨细胞株MC3T3?E1的增殖活力,降低细胞中ALP、OC的活力,减少成骨细胞中的矿化结节数,抑制成骨细胞分化及基质矿化.
关键词： microRNA?494 成骨细胞 基质矿化 TLR?4
