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精子发生 基因克隆 RSD-7cDNA Sertoli细胞文献资料
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RSD-7的克隆及其在睾丸组织中的定位
目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制.方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northern blot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术.结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7.全长1 238 bp,编码232个氨基酸,GenBank接收号为AF315467.序列分析显示,RSD-7基因编码蛋白质含有1个Ubiquitin-1ike结构域.(2)Northern blot结果显示,在8种成鼠组织中,RSD-7基因仅在睾丸组织中有明显表达.不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northern blot结果显示,出生后30 d的大鼠RSD-7基因开始表达,一直到120 d仍有表达.(3)RSD-7 cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了GST-RSD-7融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗RSD-7蛋白的多克隆抗体.(4)通过免疫组织化学方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli细胞胞浆和质膜上.结论初步分析了RSD-7基因的表达特征并制备了抗RSD-7多克隆抗体,为进一步研究RSD-7蛋白在精子发生过程中的功能提供了条件.
