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载体连接文献资料
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PAI-1启动子序列与荧光素酶报告基因扩增及载体连接问题分析
目的：探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）启动子荧光素酶表达质粒构建中扩增、转化、酶切及连接的问题。方法利用PCR技术扩增1100 bp长度PAI-1启动子片段，与PUC-19T载体连接，将PUC19T-PAI-11100质粒，及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌（DH5a）后扩增，提取并纯化；以BglⅡ，MluⅠ酶切，电泳并回收PAI-11100片段和pGL3-Basic酶切大片段，将PAI-11100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中，构建含PAI-11100片段荧光素酶质粒。结果扩增PAI-11100 bp片段成功，目的片段与载体PUC19T，pGL3-Basic载体连接条件较苛刻，需要增加连接时间及效率的摸索。结论控制扩增时DNA浓度，胶回收，感受态质量，LB平板质量，内切酶，连接时间及质量比等问题都可增加连接成功概率。
