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弥漫大B细胞淋巴瘤患者血浆shp1基因甲基化检测及其意义
目的：探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（ DLBCL ）患者血浆shp1基因甲基化状态及其临床意义。方法选取2012年1月至2013年12月天津医科大学总医院血液科收治的35例初治DLBCL患者，用甲基化特异性聚合酶链反应（ MSP）方法分别检测患者血浆、外周血白细胞（ PBL）和其中28例对应福尔马林固定石蜡包埋（ FFPE）肿瘤组织中shp1甲基化，同时以6例良性淋巴组织增生和13名健康志愿者作为对照。比较各组间3种标本中shp1基因甲基化频率，分析shp1基因甲基化状态与患者临床病理指标的相关性。结果19例对照组中均未检测到shp1基因甲基化；DLBCL患者血浆、PBL、FFPE组织中 shp1基因甲基化检出率分别为51.4％（18／35）、28.6％（10／35）、64.3％（18／28）。 shp1基因甲基化在血浆和FFPE组织中有较高的一致性（κ＝0.78，P＝0.00），在PBL和FFPE组织中一致性较低（κ＝0.36，P＝0.01）。高血清乳酸脱氢酶（LDH）的患者血浆和FFPE组织中shp1基因甲基化检出率高于LDH正常患者（13／16比5／19，11／12比7／16，P＝0.02、0.04），患者PBL中shp1基因甲基化检出率与血清LDH水平无关（ P＝0.14）。结论 DLBCL患者血浆shp1基因甲基化状态能较好地反映肿瘤组织中shp1基因甲基化状态，有望成为辅助DLBCL诊断、指导靶向治疗的相对无创的生物学指标。
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免疫抑制性受体LILRB2对白血病细胞系增殖和凋亡的影响
目的 探讨免疫抑制性受体-白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2 (LILRB2)在人白血病细胞系中的表达、功能和相关机制,为白血病的靶向治疗提供新的方向.方法 采用流式细胞术和Western blotting 等方法确定LILRB2在THP1、U937、K562等白血病细胞系中的表达情况;以LILRB2高表达的THP1细胞为研究对象,利用特异性靶向LILRB2的shRNA慢病毒载体(带GFP标记)包装病毒并感染THP1细胞,使用流式细胞分选技术获得GFP+的稳定表达细胞株,并分别在mRNA水平和蛋白水平检测shRNA干扰效率,同时监测LILRB2敲除后不同时间点细胞增殖、凋亡等细胞命运的变化,分析LILRB2敲除后其下游调控信号改变等相关分子机制.结果 3株细胞系均表达LILRB2,其中又以THP1的表达高;通过Real-Time PCR及Western blotting方法表明所构建的4个shRNA慢病毒干扰质粒中,shLILRB2-717及shLILRB2-1312能显著下调LILRB2的表达;抑制LILRB2在THP1细胞中的表达可导致细胞增殖明显减缓并出现大量坏死细胞.流式细胞术分析显示:shLILRB2-717和shLILRB2-1312组细胞早期凋亡率分别为(7.90±1.61)％和(24.80±1.32)％,显著高于对照组(Scramble组)的(3.96±0.64)％(P＜0.05);两组细胞的晚期凋亡率分别为(13.80±0.98)％和(23.60±1.03)％,均显著高于Scramble组的(10.80±0.48)％(P＜0.05);LILRB2敲除可导致SHP1和磷酸化SHP1(p-SHP1)表达的显著下调,提示LILRB2可能通过SHP1调控白血病细胞系的增殖和凋亡.结论 免疫抑制性受体LILRB2可表达在多种白血病细胞系,抑制LILRB2的表达可引起THP1细胞中SHP1和p-SHP1的显著下调并导致细胞大量凋亡,揭示SHP1可能对白血病的演变具有正向调控作用.
关键词： 免疫抑制性受体 白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2 白血病 凋亡 shp1 -
霍奇金淋巴瘤细胞SHP1表达与CD99表达的关系
目的：探究霍奇金淋巴瘤（HL）细胞SH2结构域酪氨酸磷酸化酶（SHP1）表达与CD99表达的关系。方法荧光定量PCR（RT‐PCR）、Western blot检测 HL淋巴瘤细胞株L428细胞、B淋巴母细胞株IM9细胞、浆母细胞株KM3细胞及上调CD99的稳定细胞株L428‐CD99细胞中CD99和SHP1 mRNA、蛋白水平的表达；荧光共聚焦观测L428细胞中CD99与SHP1的表达及其共定位；IM9细胞瞬时干扰CD99在基因和蛋白水平检测SHP1的表达。结果 L428和KM3细胞CD99和SHP1 mR‐NA呈现低表达，L428‐CD99细胞SHP1基因和蛋白水平较L428细胞表达增高，其蛋白表达与基因转录水平表达趋势相一致；随着CD99的上调，SHP1基因和蛋白水平表达升高；CD99为细胞膜表达，SHP1为细胞质表达；瞬时干扰CD99后，SHP1在基因和蛋白水平表达均降低。结论 SHP1在 H L中低表达可能与其CD99缺失有关，其机制仍有待于研究。
