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己糖激酶-Ⅱ基因在人结肠癌细胞中的表达及其治疗意义
目的 检测己糖激酶-Ⅱ基因(HK-Ⅱ)在人结肠癌细胞中的表达,探讨抑制HK-Ⅱ对结肠癌的治疗效应及机制.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测4种人结肠癌细胞HK-Ⅱ基因的表达情况.在HK-Ⅱ抑制剂(3-BrPA)诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞增殖和化疗敏感性变化;用琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA片段;底物比色法测定半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性;流式细胞术和紫外分光光度仪分别检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体膜通透转换孔(PTP)开放的变化.结果 HK-Ⅱ基因在4种人结肠癌细胞中明显表达.抑制HK-Ⅱ(3-BrPA)能明显控制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.300 μmol/L 3-BrPA刺激LOVO、HCT-116、HT-29、SW480细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为83.7%±2.0%、83.4%±4.1%、89.7%±3.7%和80.6%±0.9%.与小剂量3-BrPA(25 μmol/L)联合作用LOVO细胞48 h,低剂量表阿霉素(0.05、0.1μg/ml)的细胞增殖抑制率由5.1%±1.3%和10.5%±2.0%分别增至46.5%±3.2%和57.9%±3.3%(P＜0.01);而低剂量L-OHP(0.5、1.0μg/ml)的细胞增殖抑制率则由19.2%±6.1%和32.2%±2.2%分别提高到48.4%±3.2%和60.5%±4.6%(P＜0.01).50、100、150 μmoL/L 3-BrPA诱导LOVO细胞24 h后,caspase-3活性分别为1.13±0.11、1.60±0.20和3.03±0.11(P=0.000).3-BrPA作用LOVO细胞线粒体20 min后,PTP开放程度为40.0%±3.5%,而对照组(CaCl2)为37.4%±2.3%,两者相比,差异无统计学意义(P=0.348).100 μmol/L 3-BrPA刺激LOVO细胞1、3、5 h后,△ψm下降率分别为12.7%、15.4%、26.8%.结论 HK-Ⅱ基因可望成为结肠癌的有效治疗靶点.
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丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义
目的 检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达.探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响.方法 应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况.在PDK1抑制剂(dichloroacetate ,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性.结果 PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达.抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%.结论 PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点.
关键词： 结肠肿瘤 糖原酵解 丙酮酸脱氢酶激酶-1 -
大鼠脊髓损伤后醛缩酶A和M型乳酸脱氢酶的表达变化
目的探讨实验性脊髓损伤中低氧诱导因子1α(HIF-1α)调控的两种糖酵解酶--醛缩酶A(ALDA)和M型乳酸脱氢酸(LDH-M)在损伤脊髓中的活性变化趋势及其意义.方法SD大鼠随机分为损伤后12 h、1,2,3 d、1周和2周以及正常对照组,各损伤组以脊髓压迫模型致伤.采用酶组织化学方法,观察伤后各时段损伤脊髓中ALDA和LDH-M的酶活性变化情况.结果ALDA从伤后2 d到伤后1周吸光度(A)值显著下降(P＜0.05),到伤后2周才逐渐下降;LDH-M则从伤后1 d开始出现A值的显著下降(P＜0.05),至伤后2周恢复正常.结论损伤脊髓中受HIF-1α调控的ALDA和LDH-M酶活性显著增高.
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缺氧状态下大鼠肝细胞糖酵解变化的实验研究
目的探讨缺氧状态下肝细胞糖酵解的改变.方法配制3种不同浓度的低氧混合气体,用以体外培养大鼠正常肝细胞株BRL,相应地设为A、B、C组,每组设1、2、4、8、16 h 5个缺氧时相点.另以正常肝细胞作为对照.采用生物化学方法,检测各时相点肝细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及培养液中乳酸(LA)含量的变化.结果(1)与正常值比较,A、B组BRL细胞的LDH活性在各缺氧时相点均明显增加(P＜0.05),C组细胞的LDH活性从缺氧2 h开始明显增加(P＜0.05).(2)与正常值比较,A组细胞的HK活性在1、2、4、16 h时明显升高(P＜0.05);B、C两组细胞的HK活性在1 h时明显升高(P＜0.05).A组细胞的PFK活性在1、4 h时明显升高(P＜0.05);B、C两组细胞的PFK活性在4 h时明显升高(P＜0.05).3组细胞的PK活性在各缺氧时相点均明显增高(P＜0.05).(3)与正常值比较,A、B两组细胞培养液的LA浓度在缺氧2 h时开始增加(P＜0.05),C组细胞的LA浓度在缺氧4 h时开始增加(P＜0.05),并均随时间的延长而升高.结论缺氧可启动肝细胞糖酵解.
