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大片断逐步步移PCR文献资料
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氯灭活水中脊髓灰质炎病毒机制的研究
目的 探讨氯对脊髓灰质炎病毒核酸和衣壳蛋白的破坏在灭活病毒中的作用,并对病毒基因组受损区域进行定位,阐明氯灭活脊髓灰质炎病毒的机制.方法 以不同剂量(0.1、0.5、1.0、1.5和2.0mg/L)的有效氯对脊髓灰质炎病毒作用不同时间(0、15、30、45和60 min),采用大片断逐步步移PCR(long-overlapping PCR)分析氯对病毒全基因组的损伤,以ELISA技术分析氯对病毒衣壳蛋白的破坏,以细胞培养检测病毒感染性.结果 脊髓灰质炎病毒各部分对氯的抵抗力强弱存在如下关系:病毒衣壳＞基因组蛋白编码区＞基因组5'端非编码区(noncoding region, NCR)＞基因组3'端NCR＞poly A尾;脊髓灰质炎病毒的polyA尾和3'端NCR破坏可造成病毒的感染性下降,但不能完全灭活病毒;5'端NCR的破坏与病毒感染性的消失一致,损伤区域主要位于富含二级结构的区域.结论 氯主要通过破坏脊髓灰质炎病毒核酸而非衣壳蛋白灭活病毒;病毒基因组5'NCR内二级结构区域的破坏对脊髓灰质炎病毒具有致死效应.
