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微应变环境下柚皮苷对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的 探讨在微应变环境下,柚皮苷体外对培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响及其机制.方法 将体外培养的兔MSCs接种于硅橡胶膜上,利用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,对细胞进行周期性循环牵张微应变(微应变)加载.实验分成8组:对照组(常规培养),微应变组,柚皮苷不同质量浓度(2、20、200 ng/mL)组,微应变十柚皮苷(2、20、200 ng/mL)组.流式细胞仪检测各组MSCs的增殖指数;RT-PCR检测各组MSCs骨钙蛋白(OCN)、成骨特异性转录因子(Runx2)与Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)基因的表达.结果 在微应变环境下,柚皮苷使MSCs呈现明显的极性排列趋向,且细胞长轴平行力学刺激方向;显著提高MSCs的增殖活性;柚皮苷200 ng/mL显著上调OCN基因表达;不同质量浓度的柚皮苷均显著上调Runx2基因表达,且与质量浓度呈正相关;低质量浓度柚皮苷促进Col Ⅰ基因表达,而高质量浓度柚皮苷抑制了Col Ⅰ基因的表达.结论 柚皮苷可增强在微应变环境下MSCs的增殖并能够促进其向成骨分化.
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流体剪切力对人脂肪基质细胞成骨相关基因表达影响的研究
目的 探讨流体剪切力(FSS)对人脂肪基质细胞(ADSC)成骨相关基因骨钙素(OCN)、转录因子Osterix(Osx)及核心结合因子(Cbf) al/Runt相关转录因子(Runx)2表达的影响.方法 将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行常规培养(A1、A2组)和诱导培养(A3、A4组),然后分别对其加载强度为0.3 Pa的FSS(A1、A3组),未加FSS的为对照组(A2、A4组),通过逆转录-聚合酶链反应检测骨钙素、转录因子Osx及Cbfal/Runx2基因表达的情况.结果 A3、A4组在FSS加载后,其成骨相关基因的表达增强;而A1、A2组未见成骨特异性基因条带.这表明在常规培养条件下,无论是否有FSS的刺激,均无成骨特异性基因表达.结论 脂肪基质细胞在诱导培养条件下,FSS可促使其向成骨细胞分化,可作为骨组织工程的种子细胞.
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人成骨特异性转录因子cDNA胞外区片段的克隆和序列分析
目的:克隆人成骨特异性转录因子(cbfa1)cDNA胞外区片段并进行序列分析.方法:提取人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR法扩增cbfa1基因片段.将获得的预期大小的PCR产物插入pUC19克隆载体中,转化TOP10感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒进行酶切鉴定后进行序列分析.结果:从人骨肉瘤细胞系细胞提取的总RNA中成功获得人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,DNA序列分析证实其序列和文献报道一致.结论:采用基因克隆的方法得到人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,为进一步进行其结构和功能研究打下基础.
