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青蒿素及其前体化合物的提取分离与鉴定
青蒿素是我国药学工作者于1971年从植物黄花蒿Artemisia annua L. 叶中提取分离得到的一个具有过氧桥的倍半萜类化合物［1］。由于青蒿素及其衍生物蒿甲醚、双氢青蒿素及青蒿酯钠具有高效低毒的抗疟活性，尤其对具有抗氯喹能力的脑疟和急性疟有效，因此，对青蒿素及其衍生物的研究已经引起了全世界药学工作者的关注。由于青蒿素的化学合成［2，3］步骤繁多、难度较大、得率低、成本高等诸多因素，至今未能产业化生产，而从植物原料中提取分离青蒿素，用于生产青蒿素及其衍生物制剂成本仍然较高，因此，许多国家的科研工作者都试图通过生物技术的方法，简化生产步骤，提高青蒿素得率，来解决青蒿素原料生产的问题。研究资料表明：青蒿酸(artemisinic acid，Ⅰ)［4］和青蒿乙素(arteannuin B，Ⅱ)［5］在原植物中均可被转化为青蒿素。我们在提取分离这二种前体化合物的同时，从不同生长期的黄花蒿中分离得到另外5个化合物，它们是青蒿素(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、豆甾醇(Ⅴ)、2，4-羟基-6-甲氧基苯乙酮(Ⅵ)和滨蒿内酯(Ⅶ)，其中，后二者为首次从该植物中得到。此外，我们在综合多个文献［6～8］方法的基础上，对青蒿酸的提取分离方法进行了改进。1 仪器、试剂与方法1.1 仪器与试剂：熔点测定用WL-1显微测定(未校正)。IR光谱用NICOLET Impact 410 红外光谱仪测定，KBr压片。1H谱和13CNMR谱用Varian XL-500 型仪器测定，CDCl3为溶剂，TMS为内标。EI-MS用Finnigan FTMS-2000 型质谱仪测定。 柱层硅胶(100～200 目)和薄层硅胶G均由青岛海洋化工厂生产，所有试剂均为分析纯。薄层层析板用硅胶G加0.3%CMC-Na制备而成。显色剂为2%香草醛浓硫酸和2%溴甲酚蓝乙醇溶液。喷雾后，电吹风加热显色。 青蒿药材分别采于6月初、7月中旬和9月中旬(分别称为幼嫩期、旺盛期和花前期)，均采自南京市郊，经作者鉴定为菊科植物黄花蒿(A. annua L.)。1.2 提取与分离：青蒿酸的提取分离：幼嫩期黄花蒿叶1 kg，10 L丙酮冷浸3 次，每次48 h，过滤后合并滤液，经旋转薄膜蒸发仪回收溶剂，得浸膏120 g。加丙酮120 mL使溶，加柱层硅胶240 g拌匀，70 ℃减压挥干丙酮。用石油醚(60 ℃～90 ℃)搅拌上柱，用石油醚(60 ℃～90 ℃)洗脱至无色，旋转薄膜蒸发仪回收溶剂，得浸膏Ⅰ27 g。将浸膏Ⅰ用4 倍氯仿溶解，用0.5% NaOH溶液萃取3 次，第一次200 mL，后二次各100 mL，合并碱滤，浓盐酸调pH至1，用氯仿萃取3 次，第一次800 mL，后二次各400 mL，合并氯仿液，无水硫酸钠脱水后，经旋转薄膜蒸发仪回收氯仿，得浸膏Ⅱ12 g。浸膏Ⅱ用石油醚(60 ℃～90 ℃)溶解后，加18 g柱层硅胶拌样，上于装有240 g柱层硅胶的层析柱上，石油醚(60 ℃～90 ℃)洗脱至无色后，石油醚(60 ℃～90 ℃)-乙酸乙酯(95∶5)洗脱，得青蒿酸(1.92 g)。
