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人骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌细胞及其在心肌细胞移植术中的潜能性研究
目的 培养人骨髓间充质干细胞(human marrow mesenchymal stem cell,hMMSCs),体外诱导分化成心肌细胞(cardiomyocytes,CM),将细胞移植入裸鼠皮下,观察其在细胞移植中有无成瘤改变,是否具有细胞移植的潜能性.方法 体外培养扩增hMMSCs,流式细胞仪鉴定其纯度;用5-氮杂胞苷(5-Aza,10 μmol/L)体外诱导成CM,并进行鉴定;将诱导成CM的hMMSCs接种于裸鼠皮下,移植后18 d分别取接种局部皮下及心肌组织,进行组织化学染色.结果 体外培养扩增出hMMSCs,流式细胞检查CD44阳性,表达Vimentin;hMMSCs经5-Aza诱导可分化成CM,表达心肌特异性标记Troponin Ⅰ及Desmin,透镜观察可见肌丝样结构;进行细胞移植的裸鼠注射局部皮下组织没有形成结节样结构,但发现有表达Troponin Ⅰ、Desmin及Vimentin的细胞;此外,在心肌组织中也发现有表达这三种抗体的hMMSCs.结论 hMMSCs可体外分离培养扩增,具有向CM分化的潜能,体外诱导分化成CM的hMMSCs在细胞移植中并没有成瘤性,且经皮下细胞移植诱导分化成CM的hMMSCs具有向心脏归巢的现象,可用于心肌损伤的细胞移植.
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人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及向心肌细胞诱导分化的实验研究
目的:培养人骨髓间充质干细胞(Human mesenchymal stem cell,hMSCs),探讨hMSCs体外向心肌细胞(Cardiomyocytes, CM)定向诱导分化的实验研究.方法:取人的骨髓血,用Percoll(1.073 g/ml)密度梯度离心及贴壁筛选结合的方法体外培养扩增hMSCs,并进行流式细胞仪分析鉴定其免疫学表型,以未加一抗只加二抗的hMSCs作为平行对照组.选用生长良好、纯度达到95%的P5代hMSCs,用不同诱导浓度的5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)1、5、10和20 μmol/L进行诱导,对诱导后的细胞进行心肌特异性标志Troponin Ⅰ及Desmin的免疫组化鉴定.结果:体外分离纯化培养扩增出hMSCs,其CD44阳性率平均为93.26%±2.48%,与平行对照组(3.42%±1.09%)相比有明显差异(P＜0.01).经5和10 μmol/L 5-Aza诱导分化的hMSCs表达心肌特异性标记TroponinⅠ、Desmin;10 μmol/L 5-Aza诱导分化的hMSCs阳性率明显高于5 μmol/L组;在20 μmol/L组中,诱导后超过50%的细胞脱落死亡.结论:hMSCs可体外分离培养扩增,并具有向心肌细胞分化的潜能,5-Aza佳诱导浓度为10 μmol/L.
