Iptakalim ameliorates relaxation to acetylcholine in thoracic aortic rings impaired by microvesicles derived from hypoxia/ reoxygenation-treated HUVEC

新型ATP敏感性钾通道开放剂Iptakalim对慢性缺氧大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流的影响

目的 探讨慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞外向性钾电流的影响,及新型ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂Iptakalim对此时钾电流的作用.方法 SD雄性大鼠28只随机分成正常组、缺氧组[O2(10±0.5)%]、低剂量治疗组(每日缺氧前30 min Iptakalim 0.75 mg·kg-1灌胃)、高剂量治疗组(每日缺氧前30 min Iptakalim 1.5 mg·kg-1灌胃),将缺氧组和已灌胃的大鼠放入常压缺氧舱制作动物模型.4周后,急性分离大鼠动脉平滑肌细胞,用膜片钳全细胞记录技术记录细胞外向性钾电流;通过浴槽内给药,观察Iptakalim对钾电流的影响.结果 Iptakalim 0.1,1,10,100 μmol/L呈浓度依赖性增加正常大鼠肺内动脉平滑肌外向钾电流,格列本脲30 μmol/L可拮抗Iptakalim 10 μmol/L对钾电流的增强作用;与对照组大鼠相比,慢性缺氧大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流下降,电流密度减小(690±450) pA/pF vs (420±250) pA/pF(P＜0.01),膜电容增大到(4.29±1.78) pF (P＜0.01),电流-电压(I-V)曲线下移;与缺血氧组相比,每日缺氧前口服Iptakalim,细胞膜电容减小为(3.09±1.71)(P＜0.01),电流密度增大到(610±320) pA/pF(P＜0.01).结论 慢性缺氧抑制大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾通道,灌服Iptakalim可拮抗慢性缺氧对KATP通道的抑制作用.

新型KATP开放剂iptakalim对人肺动脉平滑肌KATP通道 mRNA表达的影响

目的 研究新型KATP开放剂iptakalim对原代培养人肺动脉平滑肌细胞KATP通道亚基SUR2B/Kir6.1 mRNA表达的影响,以探讨iptakalim治疗肺动脉高压的分子生物学机制. 方法 分离人手术标本正常肺组织3~4级肺小动脉,原代培养人肺动脉平滑肌细胞.正常组不予干预,试验组分别加入内皮素-1(ET-1)、ET-1+不同浓度iptakalim或Glyburide等孵育24 h.以Trizol法抽提总RNA,逆转录为cDNA,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)法检测各组细胞KATP通道 mRNA表达量. 结果 ET-1组SUR2B mRNA的表达量较正常组明显减少.iptakalim呈浓度依赖性拮抗ET-1作用,提高SUR2B mRNA表达量.Glyburide呈浓度依赖性拮抗iptakalim作用,减少SUR2B mRNA表达量.各组Kir6.1 mRNA表达量无统计学差异. 结论 新型KATP开放剂iptakalim呈浓度依赖性增加原代培养人肺动脉平滑肌细胞KATP通道mRNA表达量,可能成为较有前途治疗肺动脉高压的有效药物.

Iptakalim对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖及TGF-β和PCNA表达的影响

目的 研究新型ATP 敏感性钾通道(KATP) 开放剂Iptakalim(IPT)对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖及转化生长因子-β(TGF-β)和核增殖抗原(PCNA)表达的影响.方法 原代培养HPASMC,随机分成对照组、低氧组、低氧+IPT 10-7组、低氧+IPT 10-6组和低氧+IPT 10-5组,采用流式细胞技术检测细胞周期,用细胞免疫组织化学技术检测细胞TGF-β和PCNA表达部位分布,用Western-blot方法检测TGF-β和PCNA蛋白的表达量.结果 缺氧24 h,G0/G1期细胞比例减少,S期比例增高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学技术显示TGF-β染色主要位于细胞浆和细胞膜,PCNA染色主要位于细胞核;Western-blot结果显示低氧组TGF-β和PCNA的表达高于对照组(P<0.05)和低氧+IPT组(P<0.05),随着IPT剂量的增加,TGF-β和PCNA的表达呈下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 低氧能诱导原代培养的HPASMC增殖,刺激TGF-β和PCNA表达增高;IPT能浓度依赖性抑制这种作用,其机制可能与抑制TGF-β和PCNA的表达有关.

新型KATP开放剂iptakalim对豚鼠哮喘模型气道反应性及其结构的影响

目的:研究新型KATP通道开放剂(KATPCO)iptakalim对哮喘豚鼠气道重塑、气道高反应性的作用.方法:卵蛋白(OA)制作哮喘模型,地塞米松组在吸入OA前先给予地塞米松;iptakalim高剂量治疗组和低剂量治疗组每天吸入OA前分别灌胃给Ipt 0.75 mg·kg-1和 1.5 mg·kg-1.用多道生理记录仪记录豚鼠气管螺旋条对不同浓度组织胺的收缩反应性;用图像分析仪测定细支气管内周长(PI)、管壁面积(WA)、管壁平滑肌面积(SA),PI对WA、SA进行标准化,分别以WA/PI、SA/PI表示.结果:组织胺可使各组豚鼠气管螺旋条产生剂量依赖性收缩.哮喘组豚鼠气管螺旋条对组织胺的收缩反应明显高于正常组(P<0.05);iptakalim(灌服) 0.75、1.5 mg·kg-1均具有同雾化吸入地塞米松相似的降低气管螺旋条收缩反应效果(P>0.05).对无软骨且平滑肌成环的细支气管图像分析显示,哮喘组豚鼠支气管壁面积(29.8±4.5 μm2·μm-1)及支气管平滑肌面积(11.7±4.7 μm2·μm-1)较正常对照组(13.2±5.7,4.4±2.1 μm2·μm-1)增大(P＜0.01),iptakalim使豚鼠管壁厚度和平滑肌厚度明显下降,与正常组比较差异不显著(P>0.05).结论:口服新型KATP通道开放剂iptakalim可抑制哮喘豚鼠气道高反应性和气道壁的重构.