首页 > 文献资料
-
Leptin受体三种亚型在大鼠垂体前叶的表达及其对大鼠生长激素细胞胞内游离钙的影响
目的:观察Leptin受体(OB-R)在雄性大鼠垂体前叶中的表达,研究Leptin对大鼠垂体生长激素细胞胞内游离钙水平的影响.方法:用RT-PCR方法检测Leptin受体几种形式在大鼠垂体前叶中的表达,用梯度离心的方法分离垂体生长激素(GH)细胞,将Leptin作用于分离的生长激素细胞,检测生长激素细胞胞内钙水平的变化.结果:用RT-PCR方法检测到在雄性大鼠垂体前叶中有Leptin受体(包括通用型OB-R,短型OB-Ra及长型OB-Rb)的表达.用Percoll梯度离心法分离出的生长激素细胞约占70%～80%,10-8mol/L Leptin作用于分离培养的生长激素细胞,可引起生长激素细胞[Ca2+]i相对水平迅速降低.结论:在雄性大鼠垂体前叶有Leptin受体三种亚型的表达,且Leptin在体外可明显降低大鼠生长激素细胞胞内游离钙的相对水平.
-
Ras蛋白在地塞米松体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素细胞分化过程中的作用
目的:探究Ras蛋白在地塞米松体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素细胞分化过程中的作用.方法:本课题利用大鼠胚胎垂体细胞的无血清原代细胞培养技术,在地塞米松诱导生长激素细胞分化的过程中,加入蛋白Ras的抑制剂Manumycin,利用免疫荧光、western-blot、放射免疫分析和MTT等技术对Ras蛋白在糖皮质激素体外诱导生长激素细胞分化中的作用进行研究.结果:地塞米松能够显著提高生长激素阳性细胞百分比和生长激素的含量(P＜0.01).加入不同浓度的Manumycin后,地塞米松诱导的生长激素阳性细胞百分比显著降低(P＜0.01),生长激素的含量亦出现降低(P＜0.05).结论:Ras蛋白在地塞米松诱导垂体生长激素细胞分化过程中发挥重要作用.
-
ERK和Akt在地塞米松体外诱导胚胎期大鼠生长激素细胞分化中的作用
目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)与蛋白激酶B(Akt)在地塞米松(Dex)诱导大鼠胚胎垂体生长激素(GH)细胞分化中的作用.方法 原代培养大鼠胚胎垂体细胞48 h,加入Dex(50 nmol/L)进行诱导分化48 h,或加入Dex培养44 h后加入ERK抑制剂(10μmol/L)、Akt抑制剂(25 μmol/L)或同时加入ERK抑制剂和Akt抑制剂进行培养4h.利用免疫荧光染色计数GH阳性细胞百分比、免疫印迹法分析ERK和Akt磷酸化水平、放射免疫分析法检测细胞培养液GH含量和噻唑蓝比色法检测细胞增殖.结果 Dex显著增加GH阳性细胞百分比及细胞培养液GH含量(P＜0.05),但其对垂体细胞增殖活性无显著影响(P＞0.05).在Dex诱导GH细胞分化过程中,抑制ERK或抑制Akt均能够显著降低GH阳性细胞百分比(P＜0.05)和细胞培养液GH含量(P＜0.05);与抑制ERK或抑制Akt相比,两者联合应用能进一步显著降低GH阳性细胞百分比及细胞培养液GH含量(P＜0.05).Akt抑制剂显著降低Akt的磷酸化水平(P＜0.05),ERK抑制剂显著降低ERK的磷酸化水平(P＜0.05).结论 Dex可诱导大鼠胚胎垂体细胞向GH细胞分化,但不影响细胞增殖活性;ERK及Akt在Dex诱导GH细胞分化的过程中均发挥一定作用.
-
维甲酸、地塞米松和生长激素释放激素联合诱导生长激素细胞分化
目的 探讨维甲酸(RA)、地塞米松(Dex)和生长激素释放激素(GHRH)在诱导生长激素(GH)细胞分化中的作用.方法 原代培养大鼠胚胎垂体细胞,将RA(10-6 mol/L)、Dex(50nmol/L)和GHRH(10-7 mol/L)单独或联合应用6d,诱导大鼠胚胎垂体细胞分化,利用免疫组化检测GH阳性细胞百分比,放射免疫分析检测培养液的上清液中GH含量.结果 与对照组相比,单独应用RA显著增加GH阳性细胞的百分比和GH的含量(P<0.05)而单独应用Dex和GHRH均无此作用(P>0.05);RA诱导4d后,再加入Dex诱导2d,其诱导效应较单独应用RA明显增强(P<0.05),而加入GHRH则不起作用(P>0.05);RA和Dex联合诱导4d后,再加入GHRH诱导2d,其诱导效应较RA和Dex联合诱导明显增,强(P<0.01).结论 RA能够促进GH细胞的早期分化,Dex和GHRH则不能;RA能够与Dex、GHRH发挥协同效应,诱导GH细胞分化.
