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α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂通过抑制核转录因子-κB活化可减轻脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应
目的 研究α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)激动剂对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用及其分子机制.方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,用LPS诱导炎性细胞模型进行实验.用1、10、100和500μg/L LPS刺激细胞5 h或用100μg/L LPS刺激细胞0、2、4、8、12、24、48、72 h;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,免疫荧光法检测α7nAchR在巨噬细胞的定位,细胞增殖与毒性试剂盒(CCK8)检测1、10、100、1000μmol/Lα7nAchR激动剂(GTS-21)对LPS刺激后细胞活性的影响;ELISA检测不同浓度GTS-21对LPS刺激后促炎因子TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达.用100μg/L LPS和100μmol/L GTS-21刺激巨噬细胞,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达,免疫荧光法检测HMGB1、NF-κB p65在细胞内的位置变化.结果 100μg/L LPS刺激巨噬细胞24 h时TNF-α表达达高峰.免疫荧光法检测显示,巨噬细胞膜上有α7nAchR存在.α7nAchR激动剂GTS-21无细胞毒性作用,且可呈剂量依赖性地反转LPS诱导细胞活性下降〔(96.2±1.0)%、(92.0±1.1)%比(86.5±2.2)%,均P<0.05〕.与对照组比较,LPS组细胞上清液中TNF-α(ng/L:453.0±60.6比100.8±3.2)和IL-1β(μg/L:8.21±0.31比0.87±0.16)水平均明显升高(均P<0.05);用10μmol/L和100μmol/L GTS-21干预后可剂量依赖性地减少上清液中TNF-α(ng/L:227.5±17.5、81.0±8.8比453.0±60.6)和IL-1β(μg/L:4.86±0.72、2.32±0.45比8.21±0.31)表达水平(均P<0.05).GTS-21可明显降低LPS诱导的HMGB1表达水平(灰度值:0.788±0.130比2.061±0.330,P<0.05),并反转了LPS诱导的HMGB1胞质转移;同时GTS-21还可逆转LPS诱导的NF-κB p65核转位.结论 α7nAchR激动剂GTS-21通过抑制NF-κB活化途径而减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应.
