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高密度脂蛋白通过Akt信号通路对氧糖剥离小鼠心肌细胞的保护作用研究
目的 探讨高密度脂蛋白(HDL)对氧糖剥离(OGD)小鼠心肌细胞的保护作用.方法 通过蛋白酶消化及差速贴壁法获得原代清道夫受体B1基因敲除小鼠(SR-B1-/-)的心肌细胞与普通C57小鼠(SR-B1+/+)的心肌细胞.① 将两种细胞均分为正常对照组(Con组)、OGD组、OGD+HDL组3组,培养4 h后用碘化丙啶(PI)染色测定细胞坏死情况.② 将SR-B1+/+心肌细胞分为Con组、OGD组、OGD+HDL组、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002组4组,用PI染色测定细胞坏死情况;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定细胞凋亡情况;按照试剂盒步骤测定细胞上清液中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定SR-B1、Akt蛋白表达.结果 ① 在SR-B1+/+心肌细胞中,给予HDL可抑制OGD致细胞坏死;而HDL对OGD的SR-B1-/-心肌细胞无保护作用.② 对SR-B1+/+细胞研究显示:与Con组比较,OGD组坏死细胞显著增多,细胞活性显著下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、SR-B1表达显著下降.与OGD组比较,OGD+HDL组坏死细胞显著减少〔PI阳性细胞率:(26.71±5.94)％比(64.24±18.34)％〕,细胞活性显著升高〔(63.84±6.95)％比(26.71±5.13)％〕,上清液中LDH、CK-MB含量显著下降〔LDH(U/L):896.3±161.5比1568.3±243.5,CK-MB(U/L):304.3±72.9比583.6±81.6〕,p-Akt、SR-B1表达显著升高(p-Akt/t-Akt:0.84±0.13比0.18±0.06,SR-B1/β-actin:1.23±0.19比0.09±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05).与OGD+HDL组比较,LY294002组坏死细胞增多,细胞活性下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,p-Akt、SR-B1表达下降,且各指标与OGD组比较差异均无统计学意义.4组间细胞凋亡情况差异无统计学意义.结论 HDL对OGD小鼠心肌细胞具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt通路后上调SR-B1蛋白表达相关.
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氧糖剥离对星形胶质细胞CX43蛋白表达及分布的影响
目的 探讨氧糖剥离(oxygen-glucose deprivation,OGD)对星形胶质细胞缝隙连接蛋白Cx43蛋白表达及分布的影响,为急性脑缺血早期临床治疗提供理论基础.方法 通过OGD模拟缺血缺氧诱导激活培养的原代星形胶质细胞,采用免疫印迹及荧光显微镜观察缝隙连接蛋白Cx43的蛋白表达变化及细胞内亚分布特点.结果 星形胶质细胞经OGD诱导后在再灌12h Cx43表达上调约1.5倍(P＜0.01),有统计学意义；再灌24h时Cx43表达轻度下调(P=0.13),无统计学意义；在再灌48h其下降约34％,与对照组相比,有统计学意义(P＜0.01).同时在再灌24h时可见部分Cx43定位分布到细胞核.结论 OGD导致星形胶质细胞Cx43蛋白表达呈先升高后下降的动态变化并且有部分Cx43蛋白定位到细胞核,提示针对Cx43蛋白的干预治疗应考虑治疗时间窗.
关键词： 星形胶质细胞 connexin 43 缝隙连接 氧糖剥离 -
乙酰葛根素对氧糖剥离致神经元损伤的干预作用
本文主要通过三组实验来研究乙酰葛根素氧糖剥离对神经细胞损伤的干预作用。研究方法在氧糖剥离的基础上建立细胞模型；利用6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）法观察神经细胞的凋亡率；利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞核因子（或称为K基因结合核因子）、蛋白质（HIF-1α）以及P53基因的表达；利用蛋白印迹法或免疫印迹的实验方法测定热休克蛋白70（Hsp70）的含量以及三种不同浓度的乙酰葛根素对热休克蛋白70的影响。
