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SNARE/Munc18b复合体介导脓毒症血小板α颗粒释放及CORM-2的干预机制
目的 探讨可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体及其调节因子突触融合蛋白结合蛋白b(SNARE/Munc18b)复合体介导的脓毒症血小板α颗粒释放及一氧化碳释放分子Ⅱ(CORM-2)的干预机制.方法 采集健康成人肘静脉血,差速离心法分离出富含血小板血浆(PRP),并随机分为对照组、脂多糖(LPS)组(10 mg/L)、LPS+iCORM-2组(10 mg/L LPS+50μmol/L无活性CORM-2),LPS+L-CORM-2组(10 mg/L LPS+10μmol/L CORM-2)、LPS+H-CORM-2组(10 mg/L LPS+50μmol/L CORM-2).各组于37℃、湿度95%、5%CO2培养箱孵育30 min取上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血小板α颗粒释放物质血小板因子4(PF4)、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)含量;流式细胞仪检测血小板P-选择素的表达;透射电镜和激光共聚焦显微镜下观察血小板α颗粒的分布;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测血小板关键膜融合分子Munc18b及相关SNARE蛋白囊泡相关膜蛋白-8(VAMP-8)、突出相关蛋白-23(SNAP-23)、突出融合蛋白-11(STX-11)的表达;免疫沉淀法检测SNARE/Munc18b复合体的形成.结果 与对照组比较,LPS组血小板α颗粒释放PF4、PDGF-BB、MMP-2、P-选择素的量明显升高;而低、高浓度CORM-2能有效抑制LPS刺激后血小板α颗粒的释放〔PF4(μg/L):7.69±0.58、6.03±0.71比10.13±0.82,PDGF-BB(μg/L):112.71±1.79、102.91±5.86比128.78±1.39,MMP-2(ng/L):32.94±2.73、27.58±3.36比53.26±1.21,P-选择素:(17.14±0.57)%、(15.35±0.68)%比(23.78±0.62)%,均P<0.01〕,且呈剂量依赖趋势.透射电镜和激光共聚焦显微镜下观察,CORM-2能减少LPS刺激后血小板α颗粒向血小板膜周围分布,并可抑制与包膜融合.与对照组比较,LPS刺激后血小板Munc18b和相关SNARE蛋白表达,以及SNARE/Munc18b复合体形成均显著增加;而低、高浓度CORM-2能有效抑制LPS刺激后血小板Munc18b和SNARE蛋白表达以及SNARE/Munc18b复合体形成(Munc18b/GAPDH:0.80±0.08、0.69±0.01比0.99±0.09,VAMP-8/GAPDH:0.72±0.09、0.50±0.12比1.18±0.14,SNAP-23/GAPDH:1.18±0.22、0.63±0.10比1.90±0.08,STX-11/GAPDH:0.76±0.02、0.57±0.08比1.16±0.23,VAMP-8/Munc18b:0.65±0.09、0.53±0.07比1.21±0.20,SNAP-23/Munc18b:0.85±0.07、0.55±0.09比1.26±0.08,STX-11/Munc18b:0.78±0.05、0.61±0.10比1.39±0.16,均P<0.01),且呈剂量依赖趋势.iCORM-2则无此作用.结论 CORM-2干预能够有效抑制脓毒症时血小板α颗粒的异常释放,并呈剂量依赖趋势,其作用机制可能涉及SNARE/Munc18b复合体的形成.
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囊泡膜核苷酸转运体在核苷酸囊泡转运机制的研究进展
核苷酸在细胞内的运输不能自由穿过细胞膜,其储存与运输必须以囊泡运输的方式进行跨膜转运,当囊泡与胞膜融合时将核苷酸等内容物质释放到细胞外[1].要探讨细胞外核苷酸/核苷激发的信号通路,就必须要理解三磷酸腺苷(ATP)和其他核酸是如何从细胞内释放出来的,而这也是生理学上的一个重要问题[2];自从囊泡膜核苷酸转运体(vesicular nucleotide transporter,VNUT)被发现,其就作为ATP转运的关键因子而被广泛关注[3];现将VNUT在核苷酸囊泡转运机制的研究新进展进行综述.
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模拟失重4周增加大鼠心肌的心房利钠肽表达
失重或模拟失重引起体液的头向转移,导致上半身血容量增加,从而引起心房肌心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的改变,但现有研究报道缺乏一致的结论.本研究拟观测模拟失重大鼠心肌ANP表达的变化,并以可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(solubleN-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors,SNARE)家族相关蛋白的变化作为ANP变化的佐证.采用公认的尾部悬吊大鼠模型在地面模拟失重状态,蛋白印迹法检测心房与心室肌ANP与SNARE相关蛋白的表达水平,并进行半定量分析.结果显示,与同步对照组(CON)相比,尾部悬吊4周大鼠(SUS)心房肌ANP表达增加；在CON大鼠左心室肌仅显示微量ANP表达,但SUS大鼠心室肌ANP表达明显增加.相比CON组,SUS组囊泡SNARE (v-SNARE) VAMP-1/2在心房肌与心室肌表达明显增加；细胞膜靶标SNARE (t-SNARE) syntaxin-4的表达未改变,但SNAP-23在心房肌的表达明显增加.SNARE调节蛋白synip与Munc-18c的表达在心房肌与心室肌未发生显著性改变.上述结果表明,尾部悬吊4周引起心房肌ANP表达增加,心室肌呈现ANP表达；与ANP囊泡相关的VAMP-1/2的表达刃增加,佐证心房肌与心室肌ANP表达增加.
