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下调自噬性相关蛋白表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响
目的 观察下调自噬性相关蛋白(Beclin1)表达对抗凋亡基因(Bcl-2)表达的影响及胰腺癌细胞增殖变化,并探讨其机制.方法 构建靶向干扰质粒siBeclin1转染PANC-1细胞,细胞按照是否转染分为未转染组(Beclin1组)、空白对照组(siNegative control组)及转染组(siBeclin1组).以Western blot法及qRT-PCR法检测转染效率及Beclin1下调后Bcl-2变化;采用MTT检测siBeclin1转染后PANC-1细胞增殖.结果 Western Blot显示转染后Beclin1在siBeclin1组表达量明显低于siNegative Control组及Beclin1组(27.823±1.432、8.635±1.481、26.904±1.098,F=8.176,P＜0.01),qRT-PCR显示,与siNegativecontrol组及Beclin1组对比,转染siBeclin1后,PANC-1细胞Beclin1 mRNA表达量明显降低(0.421±0.157、0.194±0.104、0.399±0.123,F=5.239,P＜0.01),沉默效率为60％～70％;Bcl-2蛋白及mRNA在siBeclin1细胞的表达量明显高于Beclin1细胞(26.912±1.927、8.004±1.534,t=7.329,P＜0.01;0.582±0.297、0.217±0.186,t=6.835,P＜0.01);MTT显示,siBeclin1干扰后PANC-1细胞增殖能力增强,在72h分别为(61.54±6.81)％和(46.78±7.28)％,在96 h分别为(76.39±7.26)％和(54.27±8.17)％,差异均有统计学意义(t=3.674,P＜0.05;t=10.185,P＜0.01).结论 Beclin1表达下调后胰腺癌细胞增殖恶性行为增强,Beclin1可能通过下调Bcl-2表达抑制胰腺癌细胞的增殖,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.
