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前胡提取物角型吡喃骈香豆素对U266细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨白花前胡提取物角型吡喃骈香豆素(+/-)-4'-O-acetyl-3'-O-angeloyl-ciskhellactone (APC)对骨髓瘤细胞株U266细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用石油醚法提取APC,高效液相色谱检测其纯度,磁共振谱法进行结构鉴定.采用不同浓度的APC(0、10、20、30、40 μg/ml)作用于U266细胞不同时间(24、48 h),CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;作用于U266细胞24 h后,采用Annexin V/PI流式细胞术及Hochest33342荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测caspase-3、caspase-8、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK蛋白活性的变化;RT-PCR法检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)亚基表达的变化.结果 高效液相色谱检测APC纯度为98.8％.APC可抑制U266细胞的增殖,抑制率呈一定的浓度和时间依赖性,与空白对照组比较,抑制率差异均有统计学意义(P值均＜0.01);10、20、30、40 μg/ml APC作用24 h后U266细胞凋亡率分别为(5.63±0.21)％、(16.07±2.27)％、(24.83±1.65)％、(43.46±2.91)％,与空白对照组[(2.50±0.13)％]比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);caspase-3、caspase-8蛋白表达随药物浓度增加呈上调趋势,AKT、ERK变化不明显,p-AKT、p-ERK蛋白表达随药物浓度增加而明显下调;随APC药物浓度增加,hTERT mRNA的表达下调.结论 APC能抑制U266细胞增殖并诱导其凋亡,其凋亡机制可能与caspase-8、caspase-3、p-AKT、p-ERK蛋白表达变化以及hTERT亚基表达下调相关.
