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Mini-hF9基因文献资料
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microRNA125对无义突变的人凝血因子Ⅸ基因调控的分子机制
目的 构建人凝血因子Ⅸ小基因(Mini-hF9)及无义突变体,检测其mRNA表达水平,分析microRNA 125对无义突变的F9基因表达调控的分子机制.方法 利用PCR定点突变技术构建若干无义突变的人Mini-hF9并转染哺乳动物细胞HEK293T等,同时转染miR-125模拟物,通过实时荧光定量PCR(q-PCR)检测Mini-hF9基因mRNA表达水平.结果 成功构建了Mini-hF9并在细胞中正确剪接.成功构建了无义突变体M1 (nt 34 G＞T in Exon 7)、M2(nt 52 G＞T in Exon 7)和M3(nt 85 G＞T inExon 7).M1和M2突变体中Mini-hF9基因mRNA表达水平分别为野生型的14.1％ (t=15.464,P=0.004)和22.4％(t=15.755,P=0.004),通过放线菌酮处理实验证实这是由于无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)所致.分别转染miR-125a模拟物和miR-125b模拟物后,M1突变体中Mini-hF9基因mRNA水平分别升高到1.70倍(t=-4.883,P=0.039)和2.40倍(t=-17.537,P=0.003),M2突变体Mini-hF9mRNA水平分别升高到2.02倍(t=-19.264,P=0.003)和2.07倍(t=-9.158,P=0.012).结论 无义突变发生的位置是触发NMD途径的一个关键因素;microRNA 125能够通过抑制NMD途径提高无义突变的凝血因子Ⅸ的mRNA水平.
关键词： 因子Ⅸ 微RNAs 基因表达调控 无义介导的mRNA降解 Mini-hF9基因
