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ERM蛋白的生物学功能及其与妇科肿瘤的联系
ERM蛋白(ezrin/radixin/mesin,埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白)集中于富含肌动蛋白的细胞表面结构,如微绒毛、板状伪足等处.在未被激活状态下,其氨基端FERM区与羧基端交互作用,自行封闭其与胞膜、肌动蛋白的结合位点.细胞外信号刺激因子可通过改变ERM的分子构象而激活ERM蛋白后者不仅在细胞的表面结构形成、细胞连接、细胞形状维持、细胞运动性、膜运输等方面发挥重要作用,而且可通过调控细胞信号转导通路,参与调节细胞的多种生物学功能.ERM蛋白参与妇科肿瘤发展、浸润和转移的过程.
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低氧对小鼠视网膜神经节细胞-5中根蛋白表达的影响
目的 观察低氧对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)-5中根蛋白(radixin,RDX)表达的影响,探讨低氧损伤中RGC的损伤机制和可能的保护途径.方法 常规培养RGC-5,用RGC特异表面标记性抗原Thy-1鉴定;CoCl2法建立低氧模型,以含终浓度为100 μmol·L-1CoCl2培养基培养RGC-5 3 h、6h、12 h、24h、48 h,采用Real-time RT-PCR和Western blot检测RDX mRNA及其蛋白在RGC-5中的表达情况,采用免疫荧光观察RDX在RGC-5细胞中的表达及定位.结果 体外培养的RGC-5呈梭形或多边形,特异性表面标记性抗原Thy-1反应阳性.Real-time RT-PCR结果显示,低氧组RDX mRNA表达呈进行性增强,于低氧6h达到高峰后开始下降;正常对照组RDX mRNA的相对表达量为1.00±0.11,低氧3h、6h、12 h、24h、48 h分别为1.37±0.18、1.75±0.32、1.21±0.23、0.91±0.19、0.63±0.26,总体比较差异有统计学意义(F=813.717,P=0.000).Western blot结果 显示,不同培养条件下RGC-5细胞中RDX蛋白的总体比较差异有统计学意义(F=1.279,P=0.000).低氧3h、6h、12 h、24h组RDX/GAPDHA值均高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=55.301,P=0.000;t=139.986,P=0.000;t =37.552,P=0.000;t=4.183,P=0.014);低氧48 h组RDX/GAPDH A值(0.24±0.03)低于正常对照组(0.33±0.02),差异有统计学意义(t=38.889,P=0.000).在低氧组内不同时间点比较,RDX/GAPDHA值随时间的延长呈逐渐上升趋势,于低氧6h达高峰,然后开始下降,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光观察发现RDX蛋白阳性表达在RGC-5细胞中,与正常对照组相比,低氧组RDX的表达先增强(6h)后减弱.结论 低氧条件下小鼠RGC-5细胞中RDX表达水平先升高后降低,可能与视网膜新生血管疾病中RGC凋亡相关.
关键词： 根蛋白 视网膜神经节细胞-5 缺氧 细胞活力 -
高氧对小鼠视网膜新生血管模型中根蛋白的影响
目的 探讨高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成过程中根蛋白(Radixin)的表达变化,为进一步研究视网膜新生血管性疾病的防治方法提供理论基础.方法 将72只健康7d龄小鼠随机分为2组,分别为:高氧诱导组:小鼠置于含氧体积分数为75％±2％的氧箱内饲养5d构建高氧诱导视网膜新生血管动物模型;正常对照组:小鼠置于正常氧环境中饲养.待生后12d、13d、17 d、21 d、30 d分别处死小鼠.应异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FD-2000S)血管灌注造影视网膜铺片和HE染色观察视网膜新生血管的形态变化;应用免疫组织化学染色检测视网膜中Radixin的表达定位;应用RT-PCR和Westernblot检测不同时间点视网膜Radixin mRNA和蛋白表达情况.结果 免疫组织化学染色结果显示两组Radixin均有表达,但高氧诱导组小鼠视网膜新生血管管壁、血管芽、内皮细胞和神经节细胞层Radixin大量表达.Real-time-PCR及Western-blot结果显示,不同组别和不同时间点间Radixin mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(mRNA:Fgroup=59.273,P=0.000,Ftime=538.071,P=0.000,Finteraction=297.126,P=0.000;蛋白:Fgrop=419.307,P=0.000,Ftime=663.946,P=0.000,Finteraction=354.538,P=0.000).高氧诱导组小鼠生后12d、生后13 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠低,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),生后17 d、生后21 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠明显增高,差异均有统计学意义(均为P =0.000).正常对照组Radixin mRNA和蛋白的表达总体稳定在较低水平.两组生后30 d时RadixinmRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P=0.058、0.082).伴随着视网膜新生血管的增生和消退,Radixin mRNA和蛋白的表达水平均呈先升高后降低的趋势.结论 Radixin参与了视网膜新生血管的形成,可能会成为预防和治疗视网膜新生血管性疾病的新靶点.
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Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用
背景 视网膜新生血管性疾病是多种眼科疾病的病理基础,迄今为止新生血管形成的发病机制尚不完全清楚.研究显示,视网膜新生血管形成过程中radixin表达量明显增加,因此推测在视网膜新生血管相关疾病中抑制或沉默radixin基因有望成为治疗的新方法. 目的 研究radixin小发卡(shRNA)干扰质粒对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型视网膜中radixin基因表达的抑制作用,观察其对小鼠视网膜新生管形成的影响.方法 将64只出生后7d的SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组,其中模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠在体积分数(75±2)％的氧环境中饲养5d,建立OIR动物模型,正常对照组小鼠饲养于正常氧环境下.radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠于出生后第12天分别于玻璃体腔注射1μg radixin shRNA质粒和对照shRNA质粒,小鼠出生后第17天,对各组小鼠行FD-2000S血管造影术,制备视网膜铺片,观察视网膜血管形态和分布;摘取各组小鼠眼球制备视网膜切片,采用视网膜苏木精-伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核和新生血管;应用免疫组织化学染色法检测radixin在视网膜中的表达分布;分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测radixin mRNA及其蛋白在视网膜组织中的表达情况. 结果 正常对照组小鼠视网膜铺片显示视网膜血管走行正常,模型对照组小鼠视网膜后极部大片状无灌注区,可见大血管迂曲和血管壁荧光素渗漏和新生血管,shRNA质粒组小鼠视网膜可见无灌注区和微血管瘤,而radixin shRNA质粒组小鼠视网膜后极部无灌注区面积较小,血管迂曲和渗漏现象较模型对照组和shRNA质粒组明显减轻.视网膜组织病理学检查显示,模型对照组和shRNA质粒组小鼠视网膜内界膜不连续,可见大量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜,radixin shRNA质粒组视网膜内界膜形态接近正常对照组,有少量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜.免疫组织化学检查显示,正常对照组和radixin shRNA质粒组radixin表达弱于模型对照组和shRNA质粒组.正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin mRNA的相对表达量分别为1.002±0.043,2.236±0.093,0.556±0.015和2.272±0.096,各组间总体比较差异有统计学意义(F=504.545,P=0.000).正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin蛋白的相对表达量分别为1.000±0.082、1.193±0.021、0.263±0.016和1.235±0.005,各组间总体比较差异有统计学意义(F=753.522,P=0.000) radixin shRNA质粒组radixin mRNA和蛋白的相对表达量较模型对照组和shRNA质粒组明显减低,差异均有统计学意义(均P＜0.01). 结论 Radixin shRNA能有效沉默OIR动物模型视网膜中radixin基因的表达,抑制视网膜新生血管的形成.
