首页 > 文献资料
-
双荧光蛋白报告基因分析系统在微小RNA研究中的应用
目的:建立双荧光蛋白报告基因分析系统,并用来验证微小RNA的靶基因.方法:选取表达绿色荧光蛋白的质粒peDNA3/EGFP,将待验证微小RNA靶基因的一段特异性序列插入该质粒中,并与表达红色荧光蛋白质粒pDsRed2-N1共同转染细胞,转染后的细胞和提取的蛋白样品,分别用荧光显微镜和荧光分光光度计进行定性和定量检测.结果:通过对一特定小RNA(miR-27a)的可能靶基因prohibitin进行验证.终确定prohibitin是miR-27a的靶基因.结论:双荧光蛋白报告基因分析系统是一种验证微小RNA靶基因的可靠方法.
关键词： 微小RNA 荧光蛋白 靶基因 miR-27a prohibitin基因 -
prohibitin基因在胃癌中的表达及诱导胃癌细胞凋亡的机制研究
[目的]探讨siRNA介导抗增殖蛋白prohibitin(PHB)基因沉默对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制.[方法]Western blot法检测胃癌组织及相应的癌旁组织中prohibitin的蛋白表达;NC-siRNA和prohibitin-siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何的siRNA作为空白对照组,48 h后检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达.[结果]prohibitin在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P＜0.01),转染prohib-itin-siRNA后能显著降低prohibitin的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,prohibitin-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白表达显著下调(P＜0.01).[结论]靶向prohibitin-siRNA干扰可有效的降低胃癌SGC-7901细胞中prohibitin的表达,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关.
关键词： prohibitin基因 胃癌 增殖 凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
prohibitin在乳腺癌MCF-7细胞表达抑制的鉴定
目的 利用靶向prohibitin基因的shRNA表达质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,进而观察prohibitin 在转染组细胞的表达情况.方法 将构建的prohibitin基因shRNA表达质粒用脂质体法转染人乳腺癌MCF-7细胞,通过荧光定量PCR和Western blot 检测其在mRNA及蛋白水平的干扰效应.结果 转染Ⅰ组、转染Ⅱ组、转染Ⅲ组细胞PHB mRNA表达量分别是阴性对照组的27.2%,45.6%和29.4%;空白对照组的23.7%,39.7%和25.6%;转染Ⅰ组、转染Ⅱ组、转染Ⅲ组细胞PHB/β-actin灰度值比值分别是阴性对照组的27.4%,39.4%和30.1%;空白对照组的26.9%,38.7%和29.5%.构建的shRNA表达载体可以使MCF-7细胞中prohibitin基因的mRNA及其蛋白含量降低.结论 构建的针对prohibitin基因的shRNA表达载体,转染MCF-7细胞后可有效抑制细胞中prohibitin的表达,证实构建有效.
关键词： prohibitin基因 shRNA MCF-7 -
Prohibitin基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定
目的:构建靶向prohibitin基因的shRNA真核表达载体.方法:根据prohibitin mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,并进行酶切鉴定和测序.结果:酶切结果表明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计一致.结论:成功构建两个靶向prohibitin基因的shRNA真核表达载体,为下一步研究prohibitin基因在肿瘤细胞中的作用和后续的的体内外实验奠定了基础.
关键词： prohibitin基因 RNA干扰 shRNA 真核表达载体
