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成纤维细胞与肺癌细胞相互作用对膜型基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-2表达的影响
目的 研究胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MTl-MMP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法 采用Western blot方法检测各组MT1-MMP的表达.取其上清,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液中活性MMP-2的浓度.结果 H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时均有MT1-MMP表达,但混合培养后MT1-MMP表达增强(P＜0.05).H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时MMP-2均有分泌,混合培养MMP-2分泌增强(P＜0.05).结论 胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞相互作用能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达从而促进肺癌的侵袭和转移,这可能为肺癌侵袭转移的一个重要机制.
关键词： 膜型基质金属蛋白酶-1 基质金属蛋白酶-2 肺癌细胞 胚肺成纤维细胞 -
胶原三维立体培养模型中胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞的相互作用
背景:组织细胞、炎细胞可能在肿瘤细胞的侵袭、转移中发挥着重要作用,而细胞间的相互作用对基质金属蛋白酶有影响.目的:观察胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞在胶原三维立体培养条件下,相互作用对基质金属蛋白酶1,2,9表达的影响.方法:采用三维胶原立体培养模型,按比例混合胶原,4倍DMEM和灭菌水,1倍DMEM的液体胶原,其中胶原终浓度为0 75 g/mL.将GLC-82细胞、胚肺成纤维细胞分别单独培养及GLC-82细胞和胚肺成纤维细胞按5:1混合培养,待胶原固化后加入1倍DMEM培养基,48 h后收集上清液.Western blot法检测基质金属蛋白酶1表达水平,明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶2,9的表达.结果与结论:胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞混合培养组基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶2,9分泌量大于单独培养组(P<0 05).结果提示,三维立体培养条件下,胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞相互作用能通过上调基质金属蛋白酶1,2,9的表达和活化,促进肺癌侵袭和转移.
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脂氧素受体激动剂对巨细胞病毒复制增殖的影响
背景：脂氧素的抗炎及保护效应已经在多种免疫相关疾病模型中被验证，课题组前期研究结果亦显示，脂氧素受体激动剂BML-111对巨细胞病毒诱导的免疫损伤有负调节作用，那么，它对病毒的复制将产生怎样的影响呢？
目的：观察脂氧素受体激动剂BML-111对人巨细胞病毒在THP-1源巨噬细胞及人胚肺成纤维细胞中复制增殖的影响。
方法：用HCMV AD169毒株感染THP-1源巨噬细胞(MOI=0.5)，设立模拟感染组、人巨细胞病毒感染组及人巨细胞病毒+BML-111组，BML-111的终浓度为100 nmol/L；于感染后0，1，2，4，12，24，36，48 h收集各组细胞，用RT-PCR法检测细胞中IE86和pp65 mRNA的水平；人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞(MOI=0.1)，设立人巨细胞病毒感染组与人巨细胞病毒+BML-111组，逐日光镜观察人胚肺成纤维细胞病变并计数其比率；蚀斑法测定人胚肺成纤维细胞内感染性人巨细胞病毒滴度。
结果与结论：人巨细胞病毒感染巨噬细胞后，与模拟感染组相比，人巨细胞病毒感染组和人巨细胞病毒+BML-111组 IE86 mRNA 及 pp65 mRNA 表达明显升高；与人巨细胞病毒感染组相比，人巨细胞病毒+BML-111组 IE86 mRNA 及 pp65 mRNA 在细胞感染早期(4 h 内)表达明显升高，但在感染中晚期(24-72 h)，pp65 mRNA的表达明显降低。人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞后，与人巨细胞病毒感染组相比，人巨细胞病毒+BML-111组细胞提前2 d达到100%细胞病变；感染性病毒滴度提前2 d达到峰值，但两组病毒滴度峰值差异无显著性意义。结果显示 BML-111在感染早期加快人巨细胞病毒在细胞内的复制速度，在感染晚期抑制pp65基因表达；BML-111在体外对人巨细胞病毒的感染性病毒增殖量无影响。 -
肿瘤和间质细胞相互作用对肺癌MMP-2和MMP-9表达的影响
目的 研究三维立体培养中肺癌H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞相互作用对MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 活性胶原三维立体培养分为:H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养组;H460细胞和单核细胞共同培养组;胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养组;H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养组4组.明胶酶谱法测定各组培养基中MMP-2、MMP-9活性.结果 H460细胞和胚肺成纤维细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养时MMP-2酶原和活化酶活性和表达均增强,H460细胞和单核细胞共同培养时MMP-2酶原和MMP-9活性和表达增强,H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养MMP-2活化酶和MMP-9活性和表达明显增强.结论 肺癌H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞相互作用能通过上调MMP-2、MMP-9的表达促进肺癌的侵袭和转移.
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肺癌细胞与成纤维细胞、炎症细胞相互作用对MMP-1,-2,-9表达的影响
目的:研究单个核细胞、胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用.方法:活性胶原立体培养分为空白对照组(CG)、H460细胞组(HG) 、单个核细胞组(MG) 、胚肺成纤维细胞组(FG)、H460与单个核细胞混合组(HMG)、H460与胚肺成纤维细胞混合组(HFG)、三种细胞联合培养组(HMFG)共7组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9表达,Western blotting 法测定MMP-1.结果:各组细胞在立体胶原内生长良好;CG与MG未明显分泌MMP-1、MMP-2 和MMP-9,其余各组均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMFG分泌的基质金属蛋白酶明显多于其他各组. 结论: 单个核细胞、成纤维细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌;基质金属蛋白酶可降解细胞外基质(extraclluar matrix,ECM)和其它间质组织,进而促进肺癌的侵袭和转移.
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胚肺成纤维细胞对肺癌细胞增殖及MMP-2表达的影响
目的:研究体外胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞增殖及MMP-2的影响.方法:在单层平面培养条件下,H460细胞和与胚肺成纤维细胞条件培养基共同培养;单层平面及三维立体培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养,MTT或明胶酶谱法测定H460细胞的增殖活力及MMP-2的表达.结果:胚肺成纤维细胞条件培养基不能促进肺癌H460细胞的增殖和MMP-2的表达.胚肺成纤维细胞与肺癌H460细胞共同培养时出现了MMP-2的表达明显增强.结论:胚肺成纤维细胞能通过促进H460细胞MMP-2的表达影响肺癌的侵袭和转移.
