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抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究
目的 研究针对胰岛素基因增强结合蛋白1(ISL1)的小干扰RNA(siRNA)对人胃癌干细胞特性的影响.方法 体外合成ISL1的siRNA,转染人胃癌细胞系BGC823和BGC-S,逆转录酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测ISL1基因和蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞存活率.结果 构建的针对ISL1基因的siRNA能够显著抑制靶基因ISL1 mRNA和ISL1蛋白的表达.转染48h后BGC823和BGC-S细胞的存活率明显下降.结论 siRNA能明显抑制胃癌细胞BGC823和BGC-S的ISL1表达,从而对进一步研究胃癌干细胞奠定了基础.
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组蛋白H3高乙酰化对心脏相关转录因子Islet-1的调控作用
目的:探讨组蛋白H3乙酰化修饰对心脏发育早期相关转录因子胰岛素基因增强结合蛋白1(Insulin gene enhancer protein 1,Islet-1)的调控作用.方法:体外培养心肌祖细胞,分别用不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(Suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)干预(0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L),噻唑蓝(Methyl thiazoyl tetrazolium,MTT)比色实验检测SAHA对细胞增殖的影响,筛选出SAHA的合适干预浓度,用Westernblot技术检测心肌祖细胞组蛋白H3乙酰化状态,Real-timePCR检测Islet-1的mRNA表达水平变化,染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)Real-timePCR技术检测Islet-1启动子区组蛋白H3的乙酰化水平.结果:SAHA0.5、1.0μmol/L处理组较对照组细胞增殖率有所提高,但差异没有统计学意义(P＞0.05),SAHA2.0μmol/L处理组与对照组细胞增殖率相当(P＞0.05).SAHA4.0μmol/L处理组与对照组比较,细胞增殖受到抑制(P＜0.05).SAHA2.0μmol/L处理48h后心肌祖细胞H3乙酰化水平与对照组比升高7.23倍(P＜0.05).Islet-1的mRNA表达与对照组比提高了4.68倍(P＜0.05),Islet-1启动子区组蛋白H3乙酰化水平是对照组的2.08倍(P＜0.05).结论:在心肌祖细胞中,组蛋白H3高乙酰化水平促进Islet-1表达,Islet-1受到组蛋白H3乙酰化调控.
