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人催乳素受体拮抗剂文献资料
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一种新型抗乳腺癌双重靶向性融合蛋白的诱导表达和纯化
目的:将已构建好的新型抗乳腺癌双重靶向性融合蛋白Del1-9-G129R-T3的原核表达载体转化入原核表达宿主,诱导融合蛋白的表达,对之进行鉴定后进行分离纯化。方法:将融合蛋白重组表达质粒pET22b-Del1-9-G129R-T3转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,收集菌体进行超声破碎,高速离心分离沉淀和上清。通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白的表达进行检测和鉴定,利用亲和层析纯化融合蛋白。结果:SDS-PAGE结果显示,在诱导表达菌超声破碎后的沉淀物中出现一与预期分子量约24.7 kD大小相吻合的新蛋白区带,表明融合蛋白可能主要存在于细胞质中,形成不溶性包涵体。Western blot分析显示,蛋白在预期分子量处出现印迹。结论:融合蛋白Del1-9-G129R-T3已经在大肠杆菌中高效表达,为下一步融合蛋白的功能研究奠定基础。