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镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化相关因子表达的影响
目的 探讨镁离子对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关因子表达水平的影响.方法 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只.以组织贴壁法进行原代VSMCs培养,至3～5代时用于细胞实验.将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组(加入10 mmol/L β-甘油磷酸)、镁干预组[加入10 mmoL/L β-甘油磷酸+3 mmoL/L硫酸镁(MgSO4)]、2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸+3 mmol/L MgSO4+10-4μmol/L 2-APB).采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞培养14 d后钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞培养14 d后碱性磷酸酶(ALP)活性,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测0、3、6、10、14 d时细胞内基质G蛋白(MGP)mRNA和骨桥蛋白(OPN) mRNA的表达水平.结果 细胞培养14 d后,4组钙水平比较,差异有统计学意义(F=409.800,P＜0.05);高磷组、2-APB干预组钙水平高于正常对照组和镁干预组(P＜0.05).4组ALP活性比较,差异有统计学意义(F=490.901,P＜0.05);高磷组、2-APB干预组ALP活性高于正常对照组和镁干预组(P＜0.05).培养14 d后,4组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平比较,差异有统计学意义(F=1 279.905、1 157.247,P＜0.05);镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平高于高磷组及2-APB干预组(P＜0.05).动态观察MGPmRNA和OPN mRNA的表达变化,结果显示在培养第3天时,高磷组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均降低(P＜0.05),并随着时间的延长呈下降趋势;镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均升高(P＜0.05),并随着时间的延长呈上升趋势.结论 高浓度镁离子在抑制VSMCs钙化过程中可上调MGP及OPN的表达,并呈一定时间依赖性,为临床进一步研究提供了参考依据.
