以IspD为靶点的新型抗结核药物筛选研究
摘要： 目的:筛选靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyhransferase,IspD)的新型抗结核化合物,研制具有全新作用机制的新型抗多药耐药MTB药物.方法:应用高通量的微生物体外微量、直观快速的药敏试验方法,筛选得到具有抑制MTB生长的阳性化合物;同时在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中重组表达MTB的IspD,建立酶活测定方法,构建IspD酶抑制剂筛选模型,从具有抑制MTB生长的阳性化合物中筛选IspD抑制剂;对在酶水平上具有良好抑制活性的化合物进行作用机制研究,确定其对MTB (H37Rv)的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),评价其抗菌谱,测定其对非洲绿猴肾细胞(Vero)和人肝癌细胞(HepG2)的毒性.结果:从4万多个化合物中初步得到了159个具有抑制MTB生长的阳性化合物,从中筛选得到了5个IspD的抑制剂,其中的IMB-4901显示出较好的IspD抑制活性(50％ inhibiting concentration,IC50=19.3 μg· mL-1)和抗MTB活性(MIC=1.6 μg· mL-1).结论:成功获得了以IspD为靶点的新型抗MTB药物先导化合物.
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微生物来源白细胞介素-4受体拮抗剂的筛选
目的:从链霉菌4849的代谢产物中分离白细胞介素4受体(IL-4R)拮抗剂.方法:采用大孔吸附,溶媒萃取,硅胶柱色谱,重结晶等方法进行分离和纯化,以酶联免疫法进行活性跟踪,通过UV,ESIMS和NMR进行化合物的结构鉴定.结果:分离得到化合物4849A,4849B和4849C,根据波谱解析,确定其分别为金丝菌素、硫藤黄菌素和4',7-二甲氧基异黄酮,其中4',7-二甲氧基异黄酮的拮抗活性比较明显.结论:从链霉菌4849的代谢产物中首次筛选出白细胞介素-4受体拮抗剂4',7-二甲氧基异黄酮.
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维奥欣对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用
目的:探讨维奥欣对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的脑保护作用及可能的作用机制.方法:70只Wistar大鼠随机分为假手术对照组10只、CIRI组30只和维奥欣组30只,测定再灌注30,60和120min时血清及脑组织一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)和Na+-K+-ATP酶活性,观察脑超微结构的变化.结果:脑缺血再灌注期间,CIRI组血清和脑组织中SOD活性、脑组织中Na+-K+-ATP酶活性与假手术对照组比较明显下降(P＜0.01和P＜0.05);NO和MDA浓度显著升高(P＜0.01和P＜0.05);脑超微结构发生异常改变,维奥欣组上述各指标的异常变化与CIRI组相比明显减轻(P＜0.01).结论:维奥欣对CIRI具有良好的保护作用,其机制可能与提高机体SOD和Na+-K+-ATP酶活性、降低NO水平和MDA浓度及减轻氧自由基损伤等有关.
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不同剂量黄芩素在大鼠体内的药动学差异
目的:比较不同给药剂量下黄芩素在大鼠体内的药动学差异.方法:采用HPLC-ECD技术,对灌胃给予黄芩素药低、中、高剂量(20,100,200 mg·kg-1)后,大鼠血浆中黄芩苷的浓度进行测定,比较了不同给药剂量下,黄芩苷的血药浓度-时间曲线图.结果:黄芩苷的血药浓度-时间曲线均存在双峰现象.黄芩素低剂量组:黄芩苷的Tmax=1和9 h,Cmax,1 h=3.74μg·mL-1,Cmax,9h=2.18μg·mL-1,AUC0～24 h=30.44μg·mL-1·h;黄芩素中剂量组:黄芩苷的Tmax=1和13 h,Cmax,1 h=15.32μg·mL-1,Cmax,13 h=6.76μg·mL-1,AUC0～24 h=123.77μg·mL-1·h;黄芩素高剂量组:黄芩苷的Tmax=1.5和9 h,Cmax,1.5 h=14.63μg·mL-1,Cmax,9 h=10.92μg·mL-1,AUC0～24 h=149.63μg·mL-1·h.与低剂量(20 mg·kg-1)相比,中、高剂量组的剂量分别增加了4和9倍,但AUC0～24值仅提高了3.1和4倍.结论:黄芩素给药剂量在20～100 mg·kg-1间,代谢产物黄芩苷的药动学行为呈线性关系;黄芩素给药剂量在100～200 mg·kg-1间,黄芩苷的药动学行为呈非线性关系.
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鲁非罗尼对大鼠和犬的长期毒性试验
目的:考察连续给予脯氨酰羟化酶抑制剂鲁非罗尼(LF)对实验动物的毒性反应.方法:对SD大鼠和Beagle犬连续口服给药6个月,进行常规观察并测定血清和组织中的羟脯氨酸含量.结果:LF在2 500mg·kg-1·d-1剂量时使大鼠尿素氮(BUN)升高,总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)降低,血清和肝脏羟脯氨酸含量降低,肝、肺和肾重量系数增加;50和350mg·kg-1·d-1剂量对大鼠各项指标无明显影响.LF 50,150和450mg·kg-1·d-1剂量对犬各项指标无明显影响.结论:LF安全剂量高,仅在极高剂量才引起可逆性毒性反应.
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聚乙二醇接枝壳聚糖聚离子胶束的制备与体外表征研究
目的:制备载有甘草酸二铵(DG)的聚乙二醇接枝壳聚糖(mPEG-CS)聚离子胶束,考察胶束的理化性质及体外释放机制.方法:通过壳聚糖烷基化合成mPEG-CS,以三聚磷酸钠为引发剂,利用静电相互作用制备载有DG的mPEG-CS聚离子胶束.考察胶束的形态、粒径和zeta电位.用透析袋法研究载药胶束在不同介质中的释放动力学.结果:制得胶束的平均粒径为(38.2±0.9)nm;包封率为(97.6±0.7)%;胶束的稳定性良好;胶束的释放与释放介质的种类、pH值和浓度有关.结论:mPEG-CS是一种良好的制备聚离子胶束的高分子材料,聚离子胶束是离子型药物的良好载体.
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混合设计优化格列喹酮缓释片处方
目的:优化格列喹酮缓释片的处方,得到佳的缓释曲线.方法:使用混合设计对处方进行优化.结果:使用混合设计预测的处方的验证值和目标值比较,其相似因子f2能够达到70,而且其体外累积释放曲线也符合Higuchi方程和Ritger-Peppas方程.结论:混合设计是一种较方便的实验设计方法,能够有效地优化药物处方,并预测药物释放.
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复方益肾颗粒质量标准的研究
目的:建立复方益肾颗粒质量标准.方法:采用薄层色谱法对处方中自芍、党参、黄芪进行定性鉴别,HPLC法测定白芍中芍药苷的含量.结果:可鉴别白芍、党参、黄芪,芍药苷在0.105～1.050μg范围内线性关系良好,平均回收率在98.02%～99.51%,RSD在1.1%～1.6%.结论:该方法简便、准确、重现性好,可作为该制剂质量控制方法.
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卡维地洛片溶出度的研究
目的：测定卡维地洛片的溶出度。方法：按要求根据中华人民共和国药典1995年版二部“转篮法”测定其百分含量。结果：卡维地洛片在30min内累积溶出百分率>90%，回收率>95%,RSD<1%。结论：通过对卡维地洛片溶出百分率的测定，表明卡维地洛片处方设计合理。
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苯妥英锌对家兔血清高密度脂蛋白胆固醇的影响
目的:研究家免口服苯妥英锌(PHTZ)对血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响.方法:家兔分别口服PHTZ和苯妥英钠(PHTS)30d(剂量分别为:6,12,24mg·kg-1·d-1),用酶法测定血清中总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的含量,HDL-C的测定采用磷钨酸镁盐沉淀后同TC测定法,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用费氏(Friedeuald)公式计算.用原子吸收分光光度法测定服药前后血清及服药后肝中Zn和Cu浓度.结果:PHTZ高、中剂量组分别使血清HDL-C升高76.0%(P＜0.01)和52.1%(P＜0.01),LDL-C分别降低19.7%(P＞0.05)和16.6%(P＞0.05),对TC和TG无显著影响.PHTZ使血清HDL-C升高的ED50为12.7mg·kg-1,PHTS使血清HDL-C提高的ED50为23.7mg·kg-1.PHTZ中剂量组使血清Zn浓度下降29.2%,与血清HDL-C上升的百分数呈负相关(r=-0.303 5,P＞0.05),使肝脏Zn浓度上升56.2%,与血清HDL-C上升的百分数呈正相关(r=0.726 3,P＜0.05),血清和肝脏中Cu无显著变化.结论:PHTZ使家兔血清HDL-C升高比PHTS更明显,ED50比PHTS低,可能与分子结构中的Zn有关.
关键词： 苯妥英锌 家兔 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 苯妥英钠 锌 -
盐酸喹那普利的合成
目的:合成强效、高特异性血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂盐酸喹那普利.方法:以β-苯甲酰丙烯酸乙酯和L-丙氨酸为原料,经加成、脱苄、环合、还原制得盐酸喹那普利,并通过改变反应温度、反应物间的投料比和后处理对其合成工艺进行改进.结果和结论:得到的产品经IR,1H-NMR,MS和元素分析,证明是盐酸喹那普利.本合成工艺的收率为25.3%.
关键词： 喹那普利 血管紧张素转化酶抑制剂 药物合成
