暴发性肝功能衰竭小鼠模型的建立及其治疗研究
摘要： 目的:建立暴发性肝功能衰竭(FLF)小鼠模型并探讨复方甘草酸苷(SNMC)的保护作用及可能的作用机制.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Galn)和脂多糖(LPS)一次性腹腔注射构建FLF小鼠模型.利用光镜、电镜观察小鼠肝损伤情况;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞原位凋亡情况;应用免疫组化法分别检测肝组织中细胞色素C和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果:D-Galn加LPS可成功构建FLF小鼠模型.光镜及电镜可见肝细胞大量凋亡,且凋亡情况随治疗时间的延长明显改善.TUNEL检测结果表明,随着SNMC治疗时间的延长,凋亡指数逐渐降低.细胞色素C和caspase-3在模型组细胞阳性表达明显增加,随SNMC治疗时间延长表达逐渐减少.结论:利用D-Galn和LPS可以构建理想的FLF小鼠模型.SNMC能有效抑制小鼠FLF模型中的肝细胞凋亡.SNMC可能通过稳定线粒体膜抑制细胞色素C释放及其随后caspase-3活化,从而阻断肝细胞凋亡的进行.
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白细胞介素-32与大鼠克雷伯杆菌肺炎关系的研究
目的：观察白细胞介素-32（IL-32）在大鼠克雷伯杆菌肺炎中的变化，并探讨其意义。方法选择72只SD大鼠，按随机数字表法分为对照组、模型组和实验组，再按实验4 h和1、3、5 d分为4个亚组，每组6只。采用经气管注入0.3 mL细菌混悬液的方法建立大鼠克雷伯杆菌肺炎模型，实验组大鼠制模前腹腔注射IL-32抑制剂蛋白酶活化受体2（PAR2）；于制模后不同时间点尾静脉取血观察各组大鼠血清IL-32、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-8水平的变化；取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肺组织的病理学改变。结果与对照组比较，模型组IL-32、TNF-α、IL-8、IL-6随时间延长均逐渐升高，3 d时达峰值〔IL-32（ng/L）：84.40±28.24比18.57±3.86，t＝5.544，P＝0.002；TNF-α（ng/L）：79.27±14.64比17.82±3.86， t＝9.994，P＝0.000；IL-8（ng/L）：55.85±10.90比16.66±3.76，t＝8.544，P＝0.000；IL-6（ng/L）：56.65±2.57比28.48±2.11，t＝19.693，P＝0.000〕；PAR2预处理可使上述各指标均明显降低，3 d时与模型组比较差异有统计学意义〔IL-32（ng/L）：54.13±6.68比84.40±28.24，t＝2.560，P＝0.046；TNF-α（ng/L）：49.12±3.56比79.27±14.64，t＝4.901，P＝0.003；IL-8（ng/L）：22.95±2.52比55.85±10.90，t＝7.204，P＝0.000；IL-6（ng/L）：36.49±2.63比56.65±2.57，t＝13.443，P＝0.000〕。光镜下观察，实验组大鼠肺组织炎症改变较模型组有所减轻。结论 IL-32作为一种前炎症反应细胞因子，可诱导TNF-α、IL-6和IL-8的产生，抑制IL-32产生对克雷伯杆菌肺炎病情的进展有一定的作用。
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中药酒速愈对急性酒精中毒小鼠肝脏氧化酶的影响
目的:观察中药酒速愈对急性酒精中毒小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响.方法:采用乙醇体积分数为56%的红星二锅头灌胃建立急性酒精中毒小鼠模型.80只健康昆明种小鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、酒速愈高剂量组、酒速愈低剂量组和葛花解酲汤组,每组16只.各组于给药后6 h分别检测小鼠肝组织SOD、CAT活性和MDA含量.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织MDA含量明显升高(P<0.01),SOD和CAT活性均明显降低(P均<0.01);与模型组比较,各治疗组均可升高小鼠肝组织SOD和CAT活性(P<0.05或P<0.01),并可降低MDA含量(P<0.05或P<0.01);与葛花解酲汤组比较,酒速愈高、低剂量组小鼠肝组织CAT活性均明显升高(P均<0.05).结论:酒速愈能显著升高模型小鼠肝组织SOD和CAT活性,降低MDA含量,抑制脂质过氧化反应,具有抗氧化作用,从而通过调节和改善自由基代谢,减轻急性酒精中毒对肝脏的氧化损伤.
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参麦注射液对大鼠大脑皮质嘌呤含量的影响
目的：观察参麦注射液对大鼠大脑皮质嘌呤含量的影响，为参麦注射液的脑保护机制提供理论基础。方法将16只SD大鼠按随机数字表法分成生理盐水对照组、参麦注射液组，每组8只。参麦注射液组大鼠腹腔注射参麦注射液15 mL/kg，生理盐水对照组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。给药后24 h处死大鼠，取大脑皮质匀浆后提取上清液，采用高效液相色谱法（HPLC）检测大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）、腺苷以及肌酐的含量。结果与生理盐水对照组比较，参麦注射液组大鼠大脑皮质ATP、ADP、AMP、腺苷和肌酐含量均明显增加，差异均有统计学意义〔ATP（ng/L）：31.62±5.12比20.25±4.53，ADP（ng/L）：37.04±6.72比25.12±7.35，AMP（ng/L）：87.82±20.37比33.23±10.34，腺苷（ng/L）：2.82±0.15比1.12±0.61，肌酐（ng/L）：11.72±1.05比6.05±2.55，P＜0.05或P＜0.01〕。结论参麦注射液能提高大鼠大脑皮质的ATP、ADP、AMP、腺苷以及肌酐的含量，这可能是其脑保护的作用机制。
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抑颤汤对帕金森病大鼠脑内多巴胺受体和神经降压素含量的影响
目的 探讨抑颤汤治疗帕金森病(PD)的作用机制.方法 用直接向脑组织内注入神经毒剂6-羟基多巴损毁脑黑质致密部的方法建立PD大鼠模型.将100只SD大鼠随机分为正常对照组、PD模型组和抑颤汤治疗组,连续治疗8周.观察各组治疗前及治疗5周起PD大鼠旋转行为特征的变化;用放射免疫法测定治疗后大鼠脑组织多巴胺(DA)受体亲和常数(Kd)和大结合量(Bmax)以及神经降压素免疫活性物(NT-IR)含量的变化.结果 抑颤汤能明显改善PD模型大鼠的旋转行为,使治疗后大鼠每40 min的平均旋转次数从(349.56±62.28)圈降为(61.63±17.93)圈,P＜0.01].与模型组比较,抑颤汤组大鼠损毁侧脑组织DA受体Bmax和Kd明显提高[Bmax:(304.350±19.328)nmol/kg比(264.630±22.124)nmol/kg,P＜0.05;Kd:(1.476±0.546)nmol/L比(1.248±0.658)nmol/L,P＜0.01];损毁侧脑组织NT-IR含量较模型组显著降低,差异有统计学意义[(72.37±29.15)μg/kg比(152.68±26.21)μg/kg,P＜0.01].结论 抑颤汤能调节PD模型大鼠大脑释放神经降压素,增加脑内DA含量,促进受损脑黑质神经细胞修复,从而改善PD大鼠的旋转行为.
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血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α及其靶基因诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的 观察血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 104只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,血必净组于CLP后2、12、24、36、48、60 h经阴茎背静脉注射血必净注射液4 ml/kg,其余各组注射等量生理盐水.各组分别于CLP后6、12、24、72 h分别活杀大鼠取肝脏,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HIF-1α和iNOS的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和iNOS的mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组CLP后6 h HIF-1α和iNOS蛋白表达均迅速升高,其中HIF-1α蛋白表达24 h升高幅度明显,iNOS蛋白表达12 h达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组HIF-1α、iNOS 蛋白表达受到明显抑制,CLP后12、24、72 h HIF-1α、iNOS蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).模型组CLP后6 h HIF-1α、iNOS mRNA表达开始升高,12 h均达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h仍明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);血必净注射液能显著抑制肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达升高,CLP后6、12、24、72 h肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达均明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能抑制脓毒症大鼠HIF-1α及其靶基因iNOS的表达.
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麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用
目的:研究麝香酮对神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用.方法:培养SH-SY5Y神经细胞.采用含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧/缺糖和再给氧损伤;用苔盼蓝染色计数法测定细胞死亡率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和细胞凋亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;并评价药效.结果:与正常对照组比较,缺氧/缺糖和再给氧损伤模型组细胞存活率显著下降[(100.0±4.4)%比(25.6±3.7)%],细胞死亡率[(5.0±2.2)%比(71.2±9.2)%]、坏死率[(2.6±1.2)%比(46.8±10.4)%]、凋亡率[(3.1±0.8)%比(16.0±4.9)%]、LDH漏出率[(20.1±5.8)%比(66.4±7.6)%]均显著升高(P均＜0.01).麝香酮各终浓度组的细胞存活率显著提高[(42.7±1.2)%～(47.8±1.7)%,P均＜0.01],细胞死亡率[(22.7±5.2)%～(36.1±5.9)%]、坏死率[(24.3±8.3)%～(28.9±8.7)%]、凋亡率[(7.8±3.1)%～(10.4±4.9)%]、LDH漏出率[(37.6±4.1)%～(40.6±2.4)%]均显著下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤具有显著的保护作用,提示麝香酮可能应用于中风病急性期的治疗.
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2005年北京地区中医院和西医院急性心肌梗死患者住院情况的对比分析
目的 分析北京地区部分中、西医三甲医院2005年急性心肌梗死(AMI)患者住院临床特征及治疗等情况.方法 采用统一调查表,对北京地区部分三甲中、西医医院2005年1月1日-12月31日出院的AMI患者进行登记,建立数据库,用统计软件进行总结和描述性分析,描述AMI的临床特征和诊疗情况.结果 595例患者中,中、西医医院各占296例和299例;男女比例分别为1.57:1和2.48:1;平均年龄分别为(69.08±12.00)岁和(62.71±13.00)岁.中医医院AMI患者伴随冠心病、脑卒中病史及心律失常、心功能不全等并发症的患者比例明显高于西医医院(P均<0.01).治疗方面,中医医院的再灌注率以及β-受体阻滞剂、ADP受体拮抗剂、调脂剂的使用率均明显低于西医医院,而硝酸盐药物、钙拮抗剂、利尿剂、洋地黄制剂和中药静脉制剂的使用率明显高于西医医院(P<0.05或P<0.01).结论 中医医院AMI患者具有独立的临床特征,中、西医医院在遵循指南方面均较5年前有了较大进步,但仍存在一定差距.因此,在进行临床实践和研究过程中必须考虑到中医医院这个特殊的AMI患者群体.
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中药解毒生肌膏对大鼠糖尿病足溃疡肌肉中细胞因子影响的研究
目的 探讨中药解毒生肌膏对糖尿病大鼠足溃疡肌肉中细胞因子的影响.方法 腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,喂养到6个月时结扎动脉下端,7个月时造成足底部深Ⅱ度烫伤制备大鼠糖尿病足模型.将模型大鼠随机分为中药解毒生肌膏治疗组(中药组)、表皮生长因子治疗组(生长因子组)、对照组;分别予中药解毒生肌膏、重组人表皮生长因子、生理盐水局部外用治疗30 d;观察3组大鼠治疗前后溃疡面积及愈合情况,并测定溃疡肌肉组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)含量.结果 中药组总有效率为86.7%(13/15),明显高于生长因子组53.8%(7/13)(P<0.05);对照组10只实验鼠中有8只足溃疡恶化,2只无变化,总有效率为0.两个治疗组溃疡肌肉组织中VEGF和PDGF含量均高于对照组,且中药组含量明显高于生长因子组(P均<0.05).结论 应用中药解毒生肌膏治疗糖尿病大鼠足溃疡有明显的疗效,其作用机制可能是通过提高局部肌肉组织中VEGF和PDGF含量从而促进创面愈合.
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生脉注射液联用多巴胺治疗急性心肌梗死性低血压的疗效观察
目的:观察生脉注射液联用多巴胺对急性心肌梗死性低血压的治疗效果.方法:40例急性心肌梗死性低血压患者随机分为两组.在常规治疗基础上,治疗组20例采用生脉注射液联用多巴胺静脉给药;对照组20例采用多巴胺静脉给药.动态对比观察两组患者用药前及用药后1、2、5和10 d的血压、心率变化,心功能改善情况以及多巴胺停药时间.结果:用药后治疗组患者血压回升(逐渐上升)及心功能改善情况均优于对照组(P均＜0.05);用药后治疗组患者平均多巴胺停药时间(51.34 h)明显短于对照组(108.36 h,P＜0.01);两组患者用药前后心率变化差异无显著性(P均＞0.05).结论:生脉注射液联用多巴胺治疗急性心肌梗死性低血压疗效显著.
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芦黄颗粒对实验性动脉粥样硬化家兔C反应蛋白和白细胞介素-6水平的影响
目的:观察中药复方芦黄颗粒对实验性家兔动脉粥样硬化(AS)炎性细胞因子水平的影响,探讨该方防治AS的机制.方法:40只新西兰白兔随机分为5组:假手术组、模型组、血脂康对照组、芦黄颗粒高剂量组、芦黄颗粒低剂量组.采用高脂饲料喂饲及动脉内膜球囊损伤法建立兔AS模型,制模成功后给予相应的药物8周,分别测定各组C反应蛋白(CRP)和白细胞介素-6(IL-6)的浓度.结果:与假手术组比较,模型组CRP和IL-6均明显升高(P<0.01和P<0.05),芦黄颗粒高剂量组血清CRP和IL-6水平均明显低于模型组(P<0.05和P<0.01),与血脂康对照组比较差异无显著性.芦黄颗粒低剂量组CRP水平与模型组比较差异无显著性.结论:芦黄颗粒可能通过抗炎机制,发挥抑制AS的作用.
