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肝癌细胞内逆转录病毒介导β-葡萄糖醛酸苷酶基因的表达

仇凯;陈志南;刘彦仿;曲萍;金晶;胡沛臻;朱晓慧;徐力青

摘要: 目的建立高表达β-葡萄糖醛酸苷酶(β-Glu)的肝癌细胞株.方法采用脂质体介导法,将重组逆转录病毒表达载体pDOR-βG转染肝癌细胞,G418筛选出阳性克隆,用免疫组化法、酶组织化学法、原位杂交法及酶活性测定等方法观察β-Glu表达情况.结果共获得4株转染阳性克隆,其中F1,H4为β-Glu高表达克隆.免疫组化法发现转染细胞β-Glu免疫阳性物质主要分布于胞质及胞核内,酶组织化学法观察转染细胞酶活性产物主要集中于胞质中,且转染细胞较非转染细胞呈色深.原位杂交法观察阳性杂交信号于胞质及胞核,甚至核仁中, 且在转染细胞中杂交信号增强.结论通过转入人β-Glu基因可以建立β -Glu肝癌高表达模型 .该模型的建立,既可用于观察β-Glu前体药物的基因治疗效果,也能观察β-Glu基因表达对肝癌细胞表型和侵袭能力的影响.

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