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日本脑炎病毒血球凝集和凝集抑制试验的条件

肖毅;马文煜;杨敬;宋建华;丁天兵

摘要: 1 材料和方法1.1 材料血凝板为20孔U型底塑料硬板. 0.12 mol*L-1 HCl浸泡过夜,自来水,单蒸馏水(DW)冲洗干净,晾干备用. 血凝素制备是用出生3~6 d昆明种乳鼠,脑内接种JEV SA14株0.02 mL,3 d后发病处死,取脑加入少许pH 9.0硼酸盐水(BBS:0.5 mol*L-1硼酸100 mL,1.5 mol*L-1 NaCl 80 mL, 1 mol*L-1 NaOH 24 mL,DW至1000 mL),研磨后配成100 g*L-1脑悬液,5000 r*min-1离心20 min,吸取上清分装小塑料管-20℃保存. 其中少量上清经紫外灯照射2 h灭活后-20℃保存. 抗JEV-mAb mC3株,常规制备腹水,辛酸-硫酸铵法纯化,用pH 9.0 BBS配成0.01 g*L-1,-20℃保存. 普通成年白家鹅(第四军医大学实验动物中心提供),2雄1雌,翅膀下静脉取血加1/4量38 g*L-1 枸橼酸钠液抗凝血,用2~3倍量生理盐水洗涤3次(2000 r*min-1, 离心5 min),临用时用pH 6.4 PBS配成5 mL*L-1血球悬液,另新采集鹅红血球分别用血球保养液(血保液:葡萄糖20.5 g,NaCl 14.2 g,枸橼酸钠8.0 g,DW至1000 mL,高压灭菌20 min,4℃保存)和生理盐水,pH 6.4 PBS置4℃保存24 h~1 wk,作血凝和血凝抑制试验进行血球保存条件比较.

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