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构建携带hTERT I540-PTD融合基因表达框的穿梭质粒

郭晓彤;张积仁;刘文超;任军;李立文

摘要: 目的: 设计hTERT I540-PTD融合基因表达框并构建携带该表达框的穿梭质粒.方法: 根据hTERT I540表位、HIV-1 TAT-PTD和PTD4的氨基酸序列设计融合疫苗,然后根据哺乳动物偏爱密码子反翻译成基因序列.分段合成寡聚脱氧核糖核酸,磷酸化、退火后先后克隆至pSP72的BamHI-EcoRI和XbaI-BanHI之间.将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行基因测序.然后将hTERT I540-PTD融合基因表达框亚克隆至pDC315.结果: 测序结果表明hTERT I540-PTD和hTERT I540-PTD融合表达框的基因序列与设计完全一致.穿梭质粒pDC315-I540-PTD和pDC315-I540-PTD4经EcoRI酶切后均清晰可见112 bp电泳条带,与预测相符.结论: 成功获得了携带hTERT I540-PTD和hTERT I540-PTD4表达框的穿梭质粒pDC315-I540-PTD和pDC315-I540-PTD4,为制备以重组腺病毒为载体的I540-PTD基因疫苗、比较蛋白转导能力的强弱对基因疫苗免疫效能的影响奠定了基础.

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