不同腹膜后淋巴结转移能力的卵巢癌细胞小RNA(miRNA)表达差异
摘要： 目的 筛选具有腹膜后高淋巴结转移能力的浆液性卵巢癌细胞株,并分析其导致淋巴高转移的相关小RNA(microRNA,miRNAs).方法 接种人卵巢癌细胞株SKOV-3于BALB/c裸鼠腹腔,从腹膜后淋巴结中筛选出卵巢癌细胞,再次接种于裸鼠腹腔,重复分选4次后获得了稳定的高腹膜后淋巴结转移细胞株SKOV-3/LN403.对比SKOV-3和SKOV-3/LN403细胞的形态、增殖和侵袭能力,应用miRCURYTM LNA Array技术对两者的miRNA进行差异分析,通过real-time PCR验证差异表达的miRNAs.结果 稳定筛选的腹膜后高淋巴结转移卵巢癌细胞株SKOV-3/LN403,淋巴转移率高达90％(n=10),并能成功模拟卵巢癌淋巴转移患者的临床表现.SKOV-3/LN403具有比SKOV-3更强的增殖(P＜0.05)和侵袭能力(P＜0.01).miRNA的表达谱提示14种miRNA表达差异明显,包括3种miRNA上调(hsa-miR-886 5p,hsa miR-640,hsa-miR-801),11种miRNA下调(hsa let 7a,hsa-miR-30a,hsa-miR 491-3p,hsa-let-7i,hsa-miR-125b 1,hsa-miR-27a,hsa-miR-24,hsalet-7b,hsa-miR-16,hsa-miR 20a,hsa-miR-26b).Real time PCR结果和芯片结果一致.结论 SKOV-3/LN403可用于构建卵巢癌腹膜后淋巴结转移模型,其高腹膜后淋巴结转移力与miRNA分子的调控相关,为卵巢癌腹膜后淋巴结转移机制提供潜在研究靶点.
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血清血管内皮生长因子-D (VEGF-D)在多发囊泡性肺疾病(PLD)鉴别诊断中的价值
目的 探讨血清血管内皮生长因子-D(vaseular endothelial growth factor-D,VEGF-D)在淋巴管平滑肌瘤病(lymphangioleiomyomatosis,LAM)中的表达及其在多发囊泡性肺疾病(polycystic lung disease,PLD)鉴别诊断中的价值.方法 采用酶联免疫吸附试验检测50例LAM患者、34例其他多发囊泡性肺疾病(other polycystic lung disease,OPLD)和20例健康对照者的血清VEGF-D水平.结果 50例LAM均为确诊患者,其中33例通过病理确诊,23例为肺活检,5例为腹膜后肿物活检,5例为肾血管平滑肌脂肪瘤(renal angiomyolipoma,AML)活检.50例LAM患者中21例伴有乳糜胸,2例伴有乳糜腹,17例伴有AML,3例伴有结节性硬化症.50例LAM患者首发症状的年龄为19～60岁,34例OPLD患者首发症状的年龄为30～69岁,20例健康对照者的年龄为24～49岁.LAM组和健康对照组的血清VEGF-D水平分别为(3 986.1±361.2)pg/mL和(413.4±33.2) pg/mL,差异有统计学意义(P＜0.001).ROC曲线的AUC为0.995,佳临界值为692.5 pg/mL,其敏感性和特异性分别为98％和100％.OPLD组的血清VEGF-D水平为(505.7±25.6) pg/mL,与LAM组相比差异有统计学意义(P＜0.001).ROC曲线的AUC为0.991,佳临界值为901.0 pg/mL,其敏感性和特异性分别为94 ％和100％.结论 LAM患者血清VEGF-D水平显著升高,具有较高的敏感性和特异性,在LAM和OPLD鉴别诊断中有重要价值.
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T-SPOT.TB检测白塞病(BD)患者潜伏结核感染(LTBI)的临床意义及随访观察
目的 探讨连续的结核分枝杆菌特异性T细胞检测(T-SPOT.TB)技术对白塞病(Behcet's disease,BD)患者中潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的辅助诊断价值.方法 对225例BD患者进行T-SPOT.TB检测,结果阳性但无结核临床表现的BD患者为LTBI.根据检测结果分为LTBI组(66例)和非LTBI组,比较两组患者临床资料.对LTBI组患者给予预防性抗结核药物治疗并每3个月随访1次.诊断标准参照1990年BD国际诊断标准.结果 BD患者中LTBI感染率为29.3％ (66/225).LTBI组患者口腔溃疡发生的频率、次数及口腔溃疡的范围均明显高于非LTBI组(P值分别为0.008、＜0.001和0.001);LTBI组患者外阴溃疡及眼炎的发生率明显高于非LTBI组(P值分别为＜0.001和0.001).两组之间其他临床资料及实验室检查的差异无统计学意义.LTBI组患者随访的中位时间为27.9(3～58)个月,未发现活动性结核病发生.结论 T-SPOT.TB可应用于BD患者LTBI的筛查,其LTBI感染率高于健康人群(＜20％)的整体水平,对合并LTBI的BD患者进行预防性抗结核治疗后未见活动性结核病的发生.
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反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统分析维生素D3软胶囊(油性基质)
目的 开发维生素D3软胶囊(油性基质)在反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)系统中的含量测定和杂质分析方法.方法 RP-HPLC系统的色谱柱为AgilentZorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5t上m),检测波长265 nm,柱温25℃,流速1 mL/min.以乙腈混合不同比例的甲醇、水、乙醇为流动相,探究这4种流动相组分对维生素D3及其3种同分异构体在C18柱上保留行为的影响.根据保留行为研究选择合适的流动相进行含量测定和杂质分析.结果 以纯乙腈为流动相时,含量测定方法回收率仅为80.55％～84.37％;而以V(乙腈)∶V(水)=90:10为流动相时回收率显著改善(98.07％～103.23％,RSD＜1.69％),同时可改善峰形,适用于含量分析.该方法呈现良好的线性[(o.52～5.2)×10-4 t mol/L,R2＞0.999]和精密度(RSD＜2.32％).以V(乙腈)∶V(水)=95:5为流动相能够排除空白油性基质峰对杂质峰的干扰,可用于杂质分析.结论 本方法 能在RP-HPLC系统中简单而准确地进行维生素D3软胶囊(油性基质)的含量测定和杂质分析.
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肺炎克雷伯菌感染所致肝脓肿侵袭综合征病例分析并文献复习
目的 分析肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)感染所致肝脓肿侵袭综合征的病例资料并复习相关文献,以提高对此疾病的认识.方法 回顾性分析10例确诊为肺炎克雷伯菌感染所致肝脓肿侵袭综合征患者的临床特点、治疗反应及转归,复习相关文献并探讨发病机制.结果 10例患者均有肝外播散性病灶,符合肝脓肿侵袭综合征的临床特征.10例患者均有肝脓肿,均合并眼内炎并造成视力障碍甚至失明,有3例同时并发肺脓肿,其中1例合并心包、胸腔积液及感染性心内膜炎;8例有糖尿病病史,2例无基础疾病.结论 肺炎克雷伯菌感染所致的肝脓肿易引起肝外播散性病灶,好发于糖尿病及免疫缺陷人群,也可发生于免疫正常人群,其病情进展迅速,临床危害严重,早期诊断及治疗至关重要.
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成人心理弹性量表(RSA)在城市孕妇人群中的信效度评价
目的 检验成人心理弹性量表(Resilience Scale for Adults,RSA)在城市孕妇人群中的信效度.方法 以2016年6月至2017年8月期间在上海两所接产医院建大卡并愿意参加“上海亲子队列”的1 689名孕妇为研究对象,孕16周左右填写RSA,孕32～36周时填写焦虑和抑郁量表(SAS和CES-D).在对RSA进行项目分析并探索量表结构的基础上,对修订后的量表进行信效度检验.结果 经项目分析和探索性因子分析,修订后的RSA保留22个条目,含5个因子,因子负荷在0.428～0.768,累积方差解释率为52.493％.总量表的分半信度为0.798,总量表及各因子的内部一致性系数为0.546～0.850.各因子分与总量表分高度相关,相关系数为0.540～0.778;各因子间相关系数略低,为0.171～0.590.修订后的量表总分与孕晚期焦虑、抑郁水平呈显著负相关.验证性因子分析发现,x2/df值为6.783,GFI、CFI、IFI、AGFI值分别为0.919、0.881、0.881、0.897,RMSEA值为0.059.结论 修订后的RSA在孕妇人群中具有良好的心理测量属性.
关键词： 成人心理弹性量表(RSA) 孕妇 信度 效度 -
彩色多普勒超声在宫内合并宫外复合妊娠(HP)中的诊断价值
目的 探讨彩色多普勒超声在宫内合并宫外复合妊娠(heterotopic pregnancy,HP)中的诊断价值.方法 回顾性分析2013年2月至2017年4月复旦大学附属妇产科医院超声诊断为HP后经系统治疗的病例59例,总结患者的临床特征及超声图像特点.结果 59例患者中经手术及病理确诊HP 57例,误诊2例.确诊的57例患者中体外受精-胚胎移植术(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)后51例(89.5％),促排卵后4例(7.0％),自然妊娠2例(3.5％).44例(77.2％)异位妊娠病灶位子输卵管,10例(17.5％)位于宫角,2例(3.5％)位于卵巢,1例(1.8％)位于剖宫产切口瘢痕部位.根据超声图像,异位妊娠病灶分为两种类型:孕囊型(29例,50.9％)和混合包块型(28例,49.1％).孕囊型病例中异位妊娠病灶内妊娠囊直径小于宫内妊娠囊.结论 随着促排卵及辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)的广泛应用,HP已不再是一种罕见疾病.结合临床病史及经阴道彩色多普勒超声检查有助于早期诊断HP,有利于及时准确地制定临床治疗方案.
关键词： 宫内合并宫外复合妊娠(HP) 彩色多普勒超声 超声诊断 -
侧卧位直接前入路(DAA)微创全髋置换术(THA)的近期临床疗效
目的 评价侧卧位直接前入路(direct anterior approach,DAA)微创全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)的近期临床疗效.方法 对2014年7月至2016年3月安徽医科大学附属省立医院骨科由同一术者完成的应用侧卧位DAA进行初次THA的309例(367髋)患者资料进行随访研究,分别从手术时间、术中及术后总失血量、相关并发症、疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、Harris评分系统以及髋关节正位片进行临床和影像学方面的评价.结果 281例(334髋)患者获得随访,随访率90.9％.随访时间12～21个月,平均15.3个月;手术时间为(58.0±8.2) min;失血量为(320±82) mL.手术发生股骨骨折4例(5髋),血肿1例(1髋),股外侧皮神经损伤6例(6髋),深静脉血栓1例(1髋),术后早期脱位2例(2髋),阔筋膜张肌损伤2例(2髋).影像学检查髋臼假体位置:前倾角16.6°±4.8°,外展角43.5°±3.2°.与术前比较,术后随访时VAS评分和髋关节Harris评分改善显著.结论 运用侧卧位DAA行初次THA治疗终末期髋关节疾患具有良好的近期临床疗效,能够满足患者快速康复的需要,是一种安全有效的手术入路.
关键词： 全髋关节置换术(THA) 直接前方入路(DAA) 侧卧位 -
瑞芬太尼改善异氟醚致新生大鼠神经毒性的机制
目的 研究瑞芬太尼对异氟醚引起的新生大鼠海马神经毒性急性期和远期影响及其可能机制.方法 将出生7天的大鼠随机分成4组:对照组(Sham组)、异氟醚组(Iso组)、异氟醚+切开组(Iso+Ⅰ组)及异氟醚+切开+瑞芬太尼组(Ref组),采用每天2h连续3天的处理方式模拟临床多次麻醉暴露.在第3天麻醉结束后6h取新鲜海马组织用Western blot检测NF-kB p65蛋白人核的比例,q-RT-PCR检测炎症因子IL-2β、IL-6和TNF-α的mRNA的相对表达量;灌注取脑后用免疫荧光计数离子钙接头蛋白抗原分子-1(ionized calciumbinding adaptor molecule 1,IBA1)阳性细胞数量.大鼠在出生后的第65天进行被动回避实验,观察其学习与记忆能力.结果 与Sham组相比,Iso组和Iso+Ⅰ组NF-kB p65蛋白入核的比例显著增加,IL-1β与TNF-α的mRNA的表达量上调,而且这种神经毒性在幼鼠成年后表现为学习与记忆障碍,然而瑞芬太尼显著改善由异氟醚多次暴露所致的神经炎症反应及学习记忆障碍.结论 瑞芬太尼改善异氟醚致新生大鼠神经炎症反应,可能通过NF-kB p65通路发挥作用.
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大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)联合利妥昔单抗治疗初发原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)的疗效
目的 大剂量甲氨蝶呤(high-dose methotrexate,HD-MTX)联合利妥昔单抗(rituximab,R)与单用HD-MTX治疗初发的原发性中枢神经系统淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma,PCNSL)效果的评价.方法 收集2012年1月1日至2015年12月31日在复旦大学附属华山医院就诊的初发PCNSL患者的临床资料,采用回顾性的队列研究,对于接受HD-MTX联合R及单用HD-MTX治疗的患者进行疗效和预后的生存分析.结果 共有73例患者纳入研究,HD-MTX+R组38例,HD-MTX组35例.HD-MTX+R组患者的完全缓解(complete response,CR)率为84％,HD-MTX组患者的CR率为83％ (P=0.878).HD-MTX+R组患者的中位生存时间(overall survival,OS)为53个月,HD-MTX组患者的中位生存时间为27个月(P=0.047).HD-MTX+R组患者的中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)为44个月,HD-MTX组患者的中位无进展生存期为17个月(P=0.02).两组患者两组的不良反应发生率差异无统计学意义.结论 HD-MTX+R组与HD-MTX组相比CR率相似,但是加用R有利于延长PCNSL患者的OS和PFS,且加用R不会增加不良反应.
关键词： 原发中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL) 利妥昔单抗 疗效 预后 -
液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测血浆肾素活性(PRA)的方法学建立和临床应用评估
目的 建立高血压患者血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)液相色谱-串联质谱(liquid chromatograph y-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的检测方法,用于早期筛查高血压患者中的原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA).方法 arginine13C 15N作为内标,采用Phenomenex Kinetex C18柱(2.6 μm,100 mm×3.0 mm)进行分离,柱温55℃.流动相为0.2％甲醇水溶液和0.2％甲酸甲醇溶液,流速为0.5 mL/min,梯度洗脱.考察该方法的特异性、基质效应、携带污染、重复性、定量下限(lower limit of measuring interval,LLMI)、线性、不精密度、回收率、稀释一致性和血浆标本稳定性.采用LC-MS/MS方法测定296名表面健康人群(男性153名,女性143名,平均年龄48岁)及360名高血压患者(平均年龄52岁,确诊为PA 27例)的血浆样本PRA,并与放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)进行比较.结果 该方法 通过了特异性、基质效应、携带污染、重复性的性能评价.PRA的检测线性范围为0.084 4～30.000 0 ng/mL;PRA的LLMI为0.084 4ng.mL-1·h-1;日间和批内的不精密度变异系数(coefficient of variation,CV)均＜15％;准确度偏差均＜15％,回收率为92.28％～102.62％;建立的生物参考区间为0.25～5.12 ng·mL-1·h-1(立位);与RIA比较,结果相关性较好(r2=0.81,P＜0.05),但存在-18.5％的偏倚;LC-MS/MS所得PRA的醛固酮/肾素活性比值(aldosterone to renin ratio,ARR)对PA的诊断特异性与灵敏度分别为96.3％与91.0％,诊断性能更佳(AUC:0.983vs.0.894).结论我们建立了准确检测PRA的LC-MS/MS方法,适合于临床早期快速筛查PA.
