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实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测肺炎支原体

孟凡亮;何利华;顾一心;张建中;赵飞

摘要: 目的 建立一种快速、灵敏、特异的肺炎支原体实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法,以期用于临床肺炎支原体感染检测.方法 通过测序分析和序列比对,选取肺炎支原体p1基因中保守区域设计特异性引物和荧光探针,建立和完善此real-time PCR检测方法,并进行扩增效率、灵敏度及特异度评价.与已报道的肺炎支原体常规聚合酶链反应(PCR)方法进行150份临床标本检测能力比较.结果 建立的real-time PCR方法对肺炎支原体的检测限约为10 cfu.使用该方法对9株肺炎支原体ATCC标准株和30株临床分离株核酸扩增均为阳性;对10种其他支原体、13种常见呼吸道病原菌染色体及人类染色体扩增结果均为阴性.同时,临床标本的检测结果显示该方法检测灵敏度优于常规PCR.结论 本研究建立的real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测标本中肺炎支原体核酸,可适用于临床肺炎支原体诊断.

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