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近交系小耳猪肾、小肠组织中α-Gal抗原分布的研究

糜建红;应大君;张伟;曾养志

摘要: 随着器官移植工作的广泛开展,同种供体远远不能满足临床治疗的要求.目前科学研究正积极寻找可供人体器官移植的异种供体,以满足临床需要,而猪被认为是理想的异种供体之一.但猪-人异种移植的主要障碍是供体器官或组织中的异种抗原(α-半乳糖抗原, α-galactose residues,α-Gal)引起的超急性排斥反应.研究猪组织器官内α-Gal的分布情况,对猪进行基因改造,以达到猪-人异种器官移植的目的具有重大意义.本实验选用两种方法对猪肾、小肠内α-Gal抗原分布进行研究,以筛选更敏感的α-Gal检测方法.实验选用近交系中国西双版纳小耳猪(近交系数为0.9 0以上)的肾、小肠(12指肠、空肠、回肠)标本,甲醛固定,常规石蜡制片,片厚6μm. 以16、8、4μg/ml三种浓度的生物素标记的BSI-B4作为亲和物,切片孵育3 0分钟(37℃)、24和48小时(4℃),分别与SP(工作浓度1:10)、SABC 结合,DAB呈色后观察.结果为:1.SABC方法:三种不同浓度的BSI-B4在肾近曲小管上皮细胞、小肠绒毛上皮细胞及固有膜内淋巴细胞的胞浆内均有棕黄色反应,以8 μg/ml BSI-B4孵育24小时的结果为优,4μg/ml的浓度,4℃孵育48 小时,亦可获得与8μg/ml相似的结果,而16μg/ml的浓度则有较深的背底.2 .SP方法:16μg/ml BSI-B4孵育24小时(4℃)的结果与SABC法的8 μg/ml相似,但阳性反应稍弱且背底较深;8、4μg/ml两种工作浓度孵育24小时甚至更久,肾及小肠标本均显示阴性结果.因此,通过实验得出SABC法的敏感性要优于SP法.在对不同组织或器官进行α-Gal抗原分布检测的研究中,应首选SABC方法,既可获得较准确的抗原定位又可节省试剂.

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