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不同浓度重组人促红细胞生成素对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的影响研究
目的 探讨不同浓度重组人促红细胞生成素(rhEPO)对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)功能的影响.方法 2017年1—12月,培养A549细胞,取对数生长期的A549细胞,将其随机分为对照组(将细胞置于37 ℃恒温的50 ml/L CO2培养箱中进行培养)、高氧组(以3 L/min速度通过900 ml/L O2和50 ml/L CO2高纯混合气,持续通气10 min,之后进行密闭培养)及10、20、50、100 U/ml rhEPO组(分别将细胞加入含10、20、50、100 U/ml rhEPO的培养基,之后预处理24 h,再用高氧诱导),每组中包含8个复孔.24 h后,采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化,细胞增殖实验检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 高氧组细胞间空隙较大,细胞受损明显,活细胞数量显著降低,悬浮细胞明显增多;10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞损伤改善,50、100 U/ml rhEPO组细胞形态学变化与对照组较为相似.高氧组及10、20 U/ml rhEPO组细胞增殖水平小于对照组(P<0.05);10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于高氧组(P<0.05);50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于10、20 U/ml rhEPO组(P<0.05);100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于50 U/ml rhEPO组(P<0.05).高氧组及10、20 U/ml rhEPO组细胞凋亡率大于对照组(P<0.05);10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于高氧组(P<0.05);50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于10、20 U/ml rhEPO组(P<0.05);100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于50 U/ml rhEPO组(P<0.05).结论 高氧抑制A549细胞增殖、促进A549细胞凋亡,而rhEPO可减轻这种作用,且50、100 U/ml rhEPO能有效抑制A549细胞发生损伤.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化(EMT),进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.方法:培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；免疫印迹检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)、血清反应因子(SRF)、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达；Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果:在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论:Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.
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和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达
目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.
