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香烟烟雾冷凝物急性染毒对16HBE细胞Rap2B基因表达的影响
目的 观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据.方法 16HBE细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC) 24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂量,荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平,Western Blot检测其蛋白表达水平.结果 CSC对16HBE细胞有毒性作用,半数抑制浓度(IC50)为(0.08±0.006) mg/ml；CSC染毒16HBE细胞24 h后,细胞形态发生一定改变,高剂量组细胞出现明显形态学改变；与对照组比较,1/8 IC50剂量组mRNA和蛋白表达水平上调较高(P＜0.05),随剂量组浓度增高mRNA和蛋白表达下调至低(IC50组,P＜0.05).结论 Rap2B基因的表达在一定范围随着染毒浓度的改变呈现先升高后下降的趋势,提示Rap2B基因可能作为CSC靶基因在其急性染毒过程中发挥一定的作用.
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新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探
背景与目的 RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一.作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知.本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制.方法 应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响.结果 RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路.结论 RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用.
关键词： 肺肿瘤 Rap2B基因 NF-kappaB信号通路
