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二氯乙酸对ras基因的DNA损伤作用
目的 研究二氯乙酸(dichloroacetic acid,DCA)对ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制.方法 制备各ras基因外显子单链探针;DCA染毒TK6细胞,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与探针杂交显色.结果 成功制备各ras基因外显子单链探针,Southern杂交检测到DCA对N-ras基因外显子2和H-ras基因外显子2的DNA损伤片段杂交条带,未检测出其对N-ras基因外显子1和H-ras基因外显子1的DNA损伤作用.结论 DCA可造成ras基因DNA损伤,可能与其致癌作用机制密切相关,属于遗传毒性物质.
关键词： 二氯乙酸 ras基因 DNA损伤 依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应 -
应用RDPCR技术检测饮用水有机浓集物对大鼠p53基因的损伤作用
目的运用依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应(RDPCR)技术检测环境中混合污染物的DNA损伤作用.方法将水样有机浓集物腹腔注射染毒SD大鼠,提取肝、肺、肾及白细胞的DNA,运用RDPCR技术检测其对大鼠p53基因外显子7的DNA损伤作用.结果水样有机浓集物对大鼠的基因组DNA具有断裂作用;经RDPCR、杂交显色后在大鼠肝、肾组织中检测到了杂交条带,而血及肺组织中未检测到杂交条带.结论RDPCR技术可成功地运用于检测环境混合污染物.水样有机浓集物对大鼠p53基因外显子7具有DNA损伤作用,其主要靶器官为肝和肾.
关键词： 水污染 DNA损伤 依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应 p53基因 -
氯化消毒饮用水浓集物对ras基因的DNA损伤作用
目的 运用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)技术检测氯化消毒饮用水浓集物对ras基因的DNA损伤作用,探讨其可能致癌作用分子机制.方法 采用酚-氯仿-异戊醇法提取人的类淋巴母细胞(TK6)的DNA,采用PCR法制备人类N-ras基因外显子1、2和H-ras基因外显子1、2(以下分别简称为N1、N2、H1、H2)单链探针.将采集的某自来水厂水源水和管网末梢水各150 L进行浓集,分别以0.1、0.5、1L/ml的剂量(相当于原水)对TK6细胞进行染毒,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与N1、N2、H1、H2单链探针杂交、显色.结果 管网末梢水水样浓集物染毒组DNA经N2特异性引物指导下的RDPCR扩增产物,与N2单链探针杂交,在1L/ml浓度组观察到1条杂交显色条带,在0.1、0.5L/ml浓度组均未观察到杂交条带;经H1、H2、N1特异性引物指导下的RDPCR扩增产物与相应的基因特异性单链探针杂交,在0.1、0.5、1L/ml浓度组均未观察到杂交条带.水源水水样浓集物染毒组DNA经N1、N2、H1、H2特异性引物指导下的RDPCR扩增产物与相应的基因特异性单链探针杂交,在0.1、0.5、1L/ml浓度组均未观察到杂交条带.结论 氯化消毒饮用水浓集物对N2具有DNA损伤作用,具有遗传毒性.
关键词： DNA损伤 基因 RAS 水样浓集物 依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应
