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TK6和WTK1细胞tk位点突变敏感性的比较研究
目的比较研究2种起源于人类的tk+1-杂合子细胞TK6和WTK1细胞对化合物--甲基磺酸甲酯(MMS)诱发tk位点突变的敏感性,为tk位点突变敏感细胞株的筛选提供实验依据.方法用标准诱变剂MMS处理TK6和WTK1细胞,对培养物进一步作tk位点突变测试,以及细胞p53基因蛋白表达水平的检测.结果 MMS可诱导TK6和WTK1细胞tk位点的突变,其诱发突变分别是自发突变的2～7倍和3～10倍.WTK1细胞对MMS的细胞毒作用具有较大的抗性.MMS的作用下,WTK1细胞的突变频率分别是TK6细胞的15.7、19.0和20.4倍.在tk位点诱发了2种不同表型的突变集落,但以慢生长突变体为主.无论是自发突变还是MMS的诱发突变,WTK1细胞的突变频率均显著地高于TK6细胞.经MMS处理后,TK6细胞p53蛋白的表达水平增高更为明显.结论 WTK1细胞是更为敏感的tk基因突变试验检测细胞株.MMS诱发的突变有染色体畸变和基因突变,但以染色体畸变为主.
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长春花碱和秋水酰胺诱导TK6和TK6-E6细胞TK基因突变比较研究
目的比较TK6和TK6-E6人类淋巴母细胞TK基因突变试验对2种纺锤体毒物--长春花碱(VBL)和秋水酰胺(CCM)检出情况的差异.方法用长春花碱和秋水酰胺处理TK6和TK6-E6细胞24小时,进行常规TK基因突变试验,检测细胞毒性及tk位点突变频率.结果随着长春花碱和秋水酰胺浓度的增加,TK6和TK6-E6细胞的相对存活率(RS%)和相对悬浮生长率(RSG%)均降低.相同剂量下,TK6-E6细胞的RS%和RSG%均比TK6高.长春花碱和秋水酰胺对TK6和TK6-E6细胞均有致突变性,TK6-E6细胞的诱发和自发突变频率高于TK6,而除了突变频率(MF)中CCM 5.0ng/ml组和SC%中CCM 0.625ng/ml组外,其它相同剂量下,TK6-E6的MF和慢生长集落百分比(SC%)均高于TK6细胞(P＜0.05).结论两种细胞都可用于TK基因突变试验,但由于TK6-E6所用细胞量少,倍增时间较短,故建议使用TK6-E6细胞.
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TK6细胞tk基因突变试验检测甲基磺酸甲酯的诱变性
本研究通过用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)处理TK6细胞,对培养物进一步作tk位点突变测试,以及细胞p53基因蛋白表达水平的检测. 结果表明, MMS可诱导TK6细胞tk位点的突变,诱发突变是自发突变的2～7倍. 在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落:即正常生长突变体(tk-NG mutant)和慢生长突变体(tk-SG mutant). 但以慢生长突变体为主. MMS处理后,TK6细胞P53蛋白的表达水平增高. 本研究为将TK6细胞应用于我国tk基因突变的毒理学评价和机理的研究提供了实验依据.
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沉默PARP-1对miR-221表达的影响
目的 探讨PARP-1沉默TK6细胞miR-221的表达. 方法 以空载体TK6细胞为对照组,以PARP-1沉默TK6细胞为处理组.免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达量,反转录实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变. 结果 PARP-1-shRNA组细胞PARP-1蛋白表达量与对照组细胞[(1.00±0.11)倍]相比,下降了75％(P＜0.05),miR-221表达量与对照组细胞[(1.00±0.07)倍]相比,下降了26％ (P＜0.05). 结论 TK6细胞miR-221表达受PARP-1调节.
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长春花碱3和24h处理TK6细胞TK基因突变试验比较研究
[目的]比较用长春花碱对人淋巴母细胞TK6处理3 h和24 h的诱变性. [方法]用长春花碱对TK6细胞分别进行3 h和24 h染毒处理,用微孔板法进行TK基因突变试验.计算TK6细胞的接种效率(PE)、相对存活率RS、相对悬浮增值率RSG、总的相对增长率RTG、突变频率MF. [结果]在3 h处理条件下,随长春花碱浓度的增加,RS、RTG和RSG等均降低,中、高剂量水平已表现出明显的细胞毒性,但各剂量水平的MF与溶剂对照比较差异均有统计学意义(P＜0.05);在24h处理条件下,其MF随VBL浓度的增加而增加,并有一定的剂量一反应关系. [结论]较长时间处理对于长春花碱等细胞周期依赖性的毒物是必要的.
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TK6和WTK1细胞体外微核试验比较研究
目的:比较5种诱变剂诱导人类淋巴母细胞TK6和WTK1的微核反应.方法:用人的类淋巴母细胞TK6和WTK1进行体外微核试验,评价5种诱变剂的染色体损伤效应.结果:5种受试物均可诱导两种细胞微核率显著升高,但在大多数剂量和采样时间,受试物诱导的TK6细胞微核率均不同程度地高于WTK1细胞微核率.结论:TK6细胞对受试物诱导的染色体损伤更为敏感.
