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RNA 干扰 LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响
目的：探讨 LKB1/ STKll（Liver kinase B1/ Serine - Threonine Kinase II）基因沉默对前列腺癌细胞株 PC -3中增殖相关因子细胞周期素 D1（cyclinD1）、微小染色体维持缺陷蛋白2（Mcm2）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响及其可能机制。方法：将重组表达质粒 LKB1- shRNA1（LKB1- shRNA1组）和阴性对照质粒 shNC（阴性对照组）采用脂质体介导法转染至前列腺癌细胞株 PC -3中，并设未转染组，经 G418筛选出稳定转染细胞，RT - PCR 法检测转染前后细胞中 LKB1，cyclinD1，Mcm2和 PCNA 基因 mRNA 的转录水平；Western blot 法检测转染前后细胞中 LKB1，cy-clinD1，Mcm2和 PCNA 蛋白表达水平；CCK -8法检测转染后细胞的增殖能力。结果：与未转染组和阴性对照组相比， LKB1- shRNA1组细胞中 LKB1，cyclinD1，Mcm2和 PCNA 的 mRNA 和蛋白表达水平均明显上调，LKB1- shRNA1组PC -3细胞的生长速度明显增加。结论：LKB1基因沉默上调前列腺癌细胞中 cyclinD1，Mcm2和 PCNA 的表达，LKB1可作为研究前列腺癌细胞增殖分子机制的新靶点。
关键词： 前列腺癌 LKB1基因 细胞周期素D1 微小染色体维持缺陷蛋白2 增殖细胞核抗原 -
shRNA沉默P115基因对胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响及机制
目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1 (cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制.方法 采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平；免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用；ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平.结果 与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低；P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用.结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关.P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点.
