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抗丝氨酸磷酸化序列特异性单克隆抗体的制备
蛋白质磷酸化是普遍重要的一种蛋白质翻译后修饰,在哺乳细胞中大约有三分之一的蛋白质经磷酸化被修饰[1].细胞在信号转导过程中,受体胞质区和信号分子的磷酸化和去磷酸化决定着众多生物学功能的调控作用,也是蛋白质组研究的一个重要方面.我们应用小鼠淋巴细胞杂交瘤技术,成功制备了多种序列特异性丝氨酸磷酸化短肽的单克隆抗体(mAb),为进一步深入研究某些信号分子转导途径提供了重要工具.
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铬和锰在体外对肺上皮细胞的细胞毒性作用
铬、镍和锰是焊接工作所产生的烟雾中主要的金属粒子,在流行病学调查中证实,它们和焊接工作中出现的职业性哮喘密切相关.研究发现,铬和锰,但不是镍,在0.2～200μmol浓度范围内,对正常人肺上皮细胞具有细胞毒性作用.这种细胞毒性作用与细胞内磷酸蛋白的增高,以及随后释放的炎症因子IL-6和IL-8有关,但未观察到TNF-a的释放.细胞内磷酸蛋白水平在到达细胞毒性作用浓度前就已经发生了改变,IL-6和IL-8产物相比对照组增高了4.4倍.IL-6和IL-8从肺上皮细胞释放后将免疫细胞"募集"到组织损伤的部位.因此,观察到的铬和锰对肺上皮细胞的作用论证了这些金属对上皮细胞的毒性作用是通过"募集"免疫系统细胞而产生.
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乌头碱对培养新生大鼠心室肌细胞Connexin43蛋白磷酸化的影响
目的 建立细胞水平的染毒模型,观察乌头碱对心肌细胞缝隙连接蛋白Connexin43(Cx43)的影响.方法 实验分0.25、0.5、0.75、1.0、1.5和2.0μmol/L等6个不同浓度乌头碱染毒组,运用蛋白印迹法和免疫荧光技术,检测各组及对照组心肌细胞Cx43蛋白磷酸化状态的改变.结果 蛋白印迹检测显示,不同浓度染毒组心肌细胞中Cx43蛋白总量与正常对照组无显著差异;0.5 μmol/L乌头碱染毒后,Cx43开始出现脱磷酸化;当染毒浓度达到1.0μmol/L后.Cx43脱磷酸化显著,且1.5及2.0μmol/L染毒效果和1.0μmol/L染毒组相当.免疫荧光分析结果提示乌头碱作用后,心肌细胞Cx43蛋白在羧基端第368位点丝氨酸残基(Ser368)发生明显的脱磷酸化.结论 一定浓度的乌头碱能诱导心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43发生显著脱磷酸化.
关键词： 法医毒理学 细胞培养 乌头碱 Connexin43 蛋白质磷酸化
